急性肺损伤大鼠颗粒溶素与白介素-2相关性表达的研究.pdfVIP

整 匡堂瞳堂 2012年 第34眷 第2期 133 急性肺损伤(acutelunginjury，ALI)／急性呼吸窘 1．3．3 血清 白介素．2测定 腹腔注射后6h，18h，30h 迫综合征 (acuterespiratorydistresssyndrome，ARDS)是 腹腔注射 10％水合氯醛4ml／kg麻醉后心腔穿刺抽 指由多种病因(严重感染、中毒、休克、创伤等)导致的 血，注入不抗凝试管中，静置 3～4h后低温离心法分离 急性低氧性呼吸功能不全或衰竭，其本质是 以炎症介 血清 (3000r／min离心 15min)，取上清液，于洁净 的 质过度释放为特征的肺部广泛炎症反应_1j。其 中， Eppendoff管中，置4℃冰箱待检。采用双抗体夹心酶 ARDS是ALI的严重阶段。由于其发病机制的复杂 联免疫吸附试验 (ELISA)测定，操作严格按照试剂盒 性，目前尚没有有效的治疗措施 ，病死率极高，是重症 说明书进行，显色 。 监护治疗的重要课题 。本研究通过脂多糖诱导ALI大 1．4 统计学分析 结果 以均数 ±标准差(x±s)表示， 鼠模型观察肺组织颗粒溶素与血清 白介素-2的表达， 两组间比较采用 t检验 ，多组问比较用 检验 ，两两 比 从中了解二者在ALI中的调节作用及相互关系，进一 较采用 SNK-q检验。然后采用SPSS17．0进行统计分 步探讨ALI的发病机制，并为该病的防治提供理论基 析 ，P0．05为差异有统计学意义。 础 2 结果 1 材料与方法 2．1 病理学观察 NS组肺组织结构完整清晰，未见 1．1 主要仪器与试剂 LEICADM1o0O正置生物显 明显充血 、水肿 ，炎症细胞浸润不 明显 ，肺泡壁薄而光 微镜 (德国Leica公司)，PowerwareXS全波长酶标仪 滑。LPS组肺泡萎陷，肺泡壁增厚，肺泡腔变窄、出血 (美 国 BioTek)。内毒 素脂多糖 (1ipopolysaccharide， 渗出明显，肺间质明显水肿、有中性粒细胞、淋巴细胞 LPS，E．Coli055：B5)(Sigma公司)，注射前用生理盐 等炎症细胞浸润，毛细血管增生，部分可 以见到肺实 水稀释成 1g／L；兔抗颗粒溶素抗体 Anti—GNLY(美 国 变。根据 Yamasawa等 的实验报道，可以判定本实 SantaCruz公司)；免疫组化 SP试剂盒 (北京中杉试剂 验AU模型制备成功。 公司)。 2．2 IL-2的表达 两组大 鼠血清 IL．2的水平见表 1。 1．2 动物分组与模型制备 36只健康雄性Wistar大 鼠，体重 (200±20)g，6～7月龄(由山东鲁抗制药公司 表 1 NS组和 LPS组大鼠血清 白介素．2水平 (x4-s，n 提供)。随机分成两组：LPS组和NS组，实验前禁食 =6) 8h，前者给予腹腔注射 LPS4mg／kg建立 ALI模型 ， 血清 白介素一2(p／mg·L ) NS组注射等量生理盐水。每组分别在注药后 6，18， 组别 6h 18h 30h 30h后处死大 鼠，每时间点取材6只。 1．3 方法 1．3．1 病理学观察 结扎一侧主支气管，取另一侧肺 与 Ns组相 比，P0．05；LPS组两两 比较，P0．05 叶经 4％多聚甲醛灌注固定后再投入到固定液中，48h 后，常规脱水透 明，制作石蜡切片。行苏木素一伊红 2．3 GNLY表达 NS组肺组织 GNL