高通量筛选在抗病毒药物筛选中的应用.pdfVIP

((生命的化学 2008{F28卷3期 ●技术与方法 CHEMISTRY OF LIFE 2008，28(3) ·339· 义章编号：1000一I 336(2008)03—0339—04 高通量筛选在抗病毒药物筛选中的应用 史继静 焦新生 刘朝奇 (兰峡大学分了，l 物学研究所； __三峡大学医学院，宜昌443002) 摘要：岛通量筛选(high throughput sc reening，HTS)是以分予和细胞水平的实验方法为基础，往微孔板上以自动化 操作系统执行文验过程，通过灵敏快速的检测仪器采集实验数据，运用计算机对实验数据进行实验结果的分析处 理。阒此HT s具有大量样品的快速筛选、分子和细胞水平的特异性作用靶点、检测系统的高灵敏度、自动化操作 系统和数据采集传输处理系统等优点。 关键词：高通量筛选；抗病毒药物 中图分类号：R 34 细胞和分子 物学的迅速发展为药物作用靶点 1．亲合闪烁分析 研究提供了新的方法，并应用到药物筛选和研究中。 亲合闪烁分析技术通过亲合结合，将放射性配 多学科交叉使细胞分子水平筛选方法实现自动化而 基结合到包被受体的闪烁球上，从而产生光子，减 形成高通量筛选(high throughput screening，HTS)。 少放射配体标记分析中的游离配基与结合配基的分 HTS是在微孔板上以自动化操作系统执行实验过程， 离过程，使得放射配基分析可完全以自动化的方式 通过灵敏快速的检测仪器采集实验数据及用计算机 进行，适于进行高通量筛选。产生低能量放射粒子的 对实验数据进行分析处理[1。】。因此HTS具有火量样 同位素可被用来进行放射性标记，同时这种低能量 品的快速筛选、分子和细胞水平的特异性作用靶点、 放射粒子在短距离内可被重吸收， 确保只有结合 检测系统的高灵敏度、自动化操作系统和数据采集 到受体表面的配基／r被检测到光子的产生[11。此方 传输处理系统等优点。高通量筛选分析 要包括均 法已J 泛用于抗病毒药物筛选。 相分析和细胞分析，均相分析技术中应用较多的有 1．1 HIV逆转录酶活性测定 HIV(human immunodefi． 亲合闪烁分析(scintillation proximity assay，SPA)、荧 ciency virus)的逆转录酶(reverse transcriptase，RT)由两 光分析(fluorescence assay，FA)等技术。其中亲合闪 个亚单位P66和P51组成，其中P51是P66的C端部 烁分析在许多酶抑制分析和受体结合分析中被广泛 分氨基酸被切除的产物，因此P66和P5 1均具有DNA 应用；荧光分析技术主要包括荧光共振能量转移 聚合酶活性，而只有P66具有RNA酶H的功能。在 (ERT)，荧光偏振(FP)，时间分辨荧光(TR)以及荧光相 HIV复制时，逆转录的DNA聚合酶以病毒RNA为模 关谱(FRS)等【4 。据不完全统计，严重危害人类健康 板指导cDNA的合成，然后在P51的协助下 P66的 疾病中，约60％流行性传染病是由病毒引起。迄今， RNA酶H水解RNA／DNA链的RNA，最后以cDNA 全世界已发现的病毒超过3000种，需不断寻找有效 为模板合成互补的DNA。根据逆转录酶的生物学活 的抗病毒药物。本文简述一些抗病毒药物筛选方法。 性，设计以下模型用于反映HIV RT的生物学活性： 生物素标记的DNA引物与RNA模板退火，另外在 收稿日期： 2008-02—25 反应体系还含有DNA配体，配体的5’端含有l5个 作者简介：