改良人牙龈上皮细胞原代培养方法.pdfVIP

北 京 大 学 学 报 ( 医 学 版 ) JOURNALOFPEKINGUNIVERSITY(HEALTHSCIENCES) ·733- · 技 术 方 法 · 改 良人牙龈上皮细胞原代培养方法 余婧婷 ，孟焕新 ，刘凯宁 (北京大学 口腔医学院 ·I=1腔医院1．牙周科 ，2．综合科 I=1腔数字化医疗技术和材料国家工程实验室 口腔数字 医学北京市重点实验室，北京 100081) [摘 要] 目的：建立稳定的人牙龈上皮细胞的原代培养方法 ，为牙周组织的细胞学研究提供可靠的细胞来源，对 原有的原代培养方法进行了改 良，期望达到培养成功率高、原代培养时间短且操作简便的效果。方法：选择行 “冠 延长术”的牙周相对健康者9人，取冠延长术切除的领圈牙龈组织进行牙龈上皮细胞的原代培养，培养方法包括改 良酶消化法和组织块法。改良酶消化法使用2．5g／LDispaseI／酶(I／型分离酶)浸泡组织块过夜，将上皮与结缔组 织分离，再用0．025％(质量分数)不含EDTA(乙二胺四乙酸)的胰蛋白酶静置消化上皮碎片 10min，不弃去上皮碎 片直接离心并重悬细胞 ，不仅降低了酶的消化浓度，减少了消化时间，还简化了重悬细胞的过程；组织块法相对以 往方法并无改良。观察两种方法所培养原代细胞的生长过程 ，在培养成功后对细胞进行免疫细胞化学染色鉴定， 并比较两种方法的成功率和培养时间。结果：改良后的酶消化法能够比较快地培养出细胞特征明确的人牙龈上皮 细胞，成功率达88．9％，且细胞成片状生长，10—14d后可传代，传至3代后细胞形态逐渐不规则直至凋亡，而组织 块法原代培养成功率虽然相同，但时间更长，17—22d后才可传代。经免疫细胞化学染色，角蛋 白染色阳性。 结论：改良酶消化法能够快速培养出原代人牙龈上皮细胞并传代，可作为细胞学研究的稳定细胞来源。 [关键词]牙龈；上皮细胞 ；原代细胞培养 [中图分类号]R781．4 [文献标志码]A [文章编号]1671—167X(2016)04-0733-05 doi：10．3969／j．issn．1671—167X．2016．04．033 Anmodifiedculturemethodofprimaryhuman gingivalepithelialcells YUJing．ting ，MENGHuan．xin ，LIUKai—ning (1．DepartmentofPeriodontology，2．DepartmentofGeneralDentistry，PekingUniversitySchoolandHospitalofStomato— logy＆NationalEngineeringLaboratoryforDigitalandMaterialTechnologyofStomatoloyg BeijingKeyLaboratoryofDi— gitalStomatology，Beijing100081，China) ABSTRACT Objective：Toestablishastableprima~ culturemethodofhumangingivalepithelialcells， withahighersuccessfulrateand shorterculturetime．M ethods：Ninepatientswhoreceived “crown— lengtheningsurgery”withrelativelyhealthyperiodontalconditionswereselected(n=9)．Gingivalsam． pieswerecollectedfrom the9donorsduringgingivectomy．Gingivalepithelialcellswereisolatedandcul— turedbybothanadvancedenzymedigestionmethodandatissueexplantmethod．Intheadvancedenzyme digestioncultureprocess，2．5g／LDispaseI1wasusedtoseparatetheepithelialtissuepartfrom thecon． nectivetissuepart．whichlastedfor