TAK1siRNA基因沉默对RA滑膜细胞ATF2表达的作用.pdfVIP

·中文论著摘要· 表达的影响 目 的 要求培养滑膜原代细胞，制备良好的转染剂，然后将转染液导入滑膜细胞内， 抑制人类风湿性关节炎滑膜细胞TAKl基因，给予体外刺激因素干预，检测ATF2 表达量，为人类风湿性关节炎的治疗及研究提供基础及依据。 方 法 人类风湿性关节炎滑膜细胞体外实验培养，收集病人膝关节置换术、髋关节 置换术中的类风湿性关节炎病人病变的类风湿性滑膜组织，采用酶消化法进行体 外滑膜细胞的培养，在培养类风湿滑膜细胞的过程中，采用n型胶原酶及胰酶对 标本进行消化体外培养，倒置显微镜下观察细胞生长状态及细胞数量。定制siRNA 转染试剂及转染诱导剂， 制备可靠的特异性siRNA，将培养的类风湿细胞分组， 采用体外的方式将转染剂导入需要检测的细胞内，抑制TAKl基因，然后给予刺 激因素刺激完毕后，利用Elisa检测转录因子ATF2的表达情况。 结 果 该实验四例患者的滑膜细胞标本均采用体外消化培养法成功培养，平均传代 至3-5代，细胞生长状态较好，比较稳定，大约传至第7代时细胞生长减慢，出 现老化状态。免疫组化鉴定滑膜细胞均一地表达Vimetin(95％)、表明所培养的 细胞是滑膜成纤维细胞。设计的4组标本分别是实验组转染TAKlsiRNA、阳性对 刺激因素刺激生长，经检测，实验组与对照组相比转录因子ATF2含量有明显的 差异，呈现出组间差异，这表明，通过抑制TAKl可降低ATF2的转录活性，并 可能进一步下调炎性因子的释放及作用，以降低对骨与软骨的损伤。 结论 成功提取类风湿性关节炎滑膜原代细胞，并进行培养，为之后的实验打下良 好的基础。定制转染试剂，将其成功转入细胞内，通过对TAKI激酶的抑制来降 低ATF2的转录活性，为治疗类风湿性关节炎奠定的良好的基础。 关键词 类风湿性关节炎，滑膜细胞，RNA干扰，ATF2，TAKl 2 ·英文论著摘要· InhibitionofsiRNATAKlon the gene ofATF2RA cellslnfluence expression synovial Obective ofcultured transfection Requirementssynovial cells，preparinggood agents，and thentransferintothe lesionswithinthe invitro dye synovial cell，give stimuli， inhibitionofhumanrheumatoidarthritis cell factorATF2 synovialtranscription humanrheumatoidarthritistreatmentandresearchto the expression，for provide foundationandbasis． Methods Humanrheumatoidarthritis cellinvitro in