TAT-血红素氧合酶-1融合蛋白对大鼠原位肝移植肝细胞凋亡的作用.pdfVIP

研究论文 的影响 中文摘要 TAT-血红素氧合酶一1融合蛋白 对大鼠原位肝移植肝细胞凋亡的影响 摘 要 目的：肝脏缺血再灌注损伤导致的移植肝脏功能衰竭或早期无功能是 原位肝脏移植术后的严重并发症。研究表明，肝细胞凋亡是肝脏缺血再灌 注损伤的重要机制之一。有研究报道，通过运用药物、器官缺血预处理、 热休克等诱导血红素氧合酶．I(HO．1，热休克蛋832)高表达，可以减轻器 官的缺血再灌注损伤。HO．1是机体血红素分解代谢过程中的限速酶，催 化损伤、．减轻炎症反应等作用，在器官保护方面引起了国内外学者的广泛 关注。蛋白结构转导域(PTDs)是-d,段不依赖于传统的受体或细胞吞噬作 用、可以自由地穿过生物膜的肽链，蛋白质或多肽与PTDsJ([|连后可进入 细胞内保持其活性并发挥其生物功能。其中，包含11氨基酸(肽序列： 心脏冷保存期成功转导进入心肌细胞并保持其生物活性，延长心脏冷保存 期时间、减轻移植心脏的缺血再灌注损伤。但关于其在肝移植缺血再灌注 损伤中作用的研究鲜有报道。本研究前期实验证实，TAT．HO．1融合蛋白 可以有效转导进入离体培养的L．02细胞及在体大鼠肝组织细胞、在冷保存 期可转导进入大鼠肝脏并减轻肝实质细胞和肝窦内皮细胞(SECs)凋亡，对 肝功能有一定的保护作用。本研究探讨TAT与HO．1融合蛋白能否转导入 大鼠原位肝移植肝细胞，以及对移植肝脏功能和细胞凋亡情况的影响。 方法：将HO．1 BL．2 纯化，Western 实验。 健康成年雄性SD大鼠，体重250～2809，按随机数字表随机分为供体 中文摘要 参照Kamada等的二袖套法建立大鼠原位肝移植模型。C组和P组分别于肝 即刻(To)、肝脏移植术后1h(T1)、6h(T2)矛I12h(T3)时各随机选取6只大鼠， 乙醚麻醉后开腹经腹主动脉采血3m1分离血清，并切取肝组织标本立即液 氮冷冻，血清与肝组织均置于．80℃冰箱保存。 应用免疫组化染色法检测肝脏组织HO．1含量，分析TAT．HO．1转导进 入肝脏的情况。全自动生化分析仪测定血清ALT水平，放射免疫分析法检 测血清HA水平。原位末端脱氧核苷酸转移酶标记(TUNEL)法分别检测肝 训[州A表达水平。苏木素．伊红(HE)染色，光镜下观察肝组织病理学变化。 结果： l 肝组织中HO．1含量两组肝脏移植术后1h、6h、12h肝组织中可见明 显棕黄色HO．1阳性染色分布；与C组相比，P组肝组织中HO．1含量均高于 C组(尸O．05)。 2 血清ALT和HA水平测定两组各组内血清ALT矛IHA水平T1～T3时均 0．05)。 mRNA水平两组各 3肝实质细胞和SECs凋亡情况与肝组织Caspase．3 mRNA水平，在T2时高于 组内肝实质细胞$1SECs的AI与肝组织Caspase．3 其余各时点，差异有统计学意义(尸O．05)。与C组比较，P组To时肝实质 细胞和SECs mRNA水平差异无统计学意义(尸 AI与肝组织Caspase．3 o．os)，T1-T3时均降低，差异有统计学意义(尸O．05)。 4组织病理学变化肝移植术毕6h，P组可见肝细胞浊肿，肝索轻度增宽， 汇管区少量中性粒细胞浸润； C组可见肝细胞浊肿及空泡变性，肝细胞点 片状坏死，汇管区中性粒细胞浸润增多。 结论：TAT．HO．1融合蛋白在大鼠原位肝移植术后经静脉注射可以转 mRNA表达水平，减轻肝 导进入大鼠移植肝脏，可能通过下调Caspase．3 实质细胞$1SECs凋亡，从而对大鼠肝移植术后的肝脏功能发挥保护作用。 中文摘要 蛋白转导技术有望成为减轻肝移植肝脏缺血再灌注损伤的新措施。 关键词：基因产物，tat；蛋