仙龙颗粒对佐剂性关节炎大鼠血清IL-1含量影响.docxVIP

陕西中医学院２００７届硕士学位论文物。近年来，生物治剂及基因治疗的研究进展为ＲＡ治疗开拓了新的途径，但其费用高、安全性不明确以及远期作用不可预测等问题限制了它们的临床应用。中医药在治疗ＲＡ方面具有一定优势，临床应用广泛而灵活。目前主要沿袭三种趋势：一是中成药治疗，现在已经开发成功的中成药有正清风痛灵、腰痛灵、风寒湿痛片等；二是经典做法采用辨证论治，分型论治，如用发汗通痹法、调和营卫法、解毒通络法、温经通络法、活血化瘀法、补肾健脾法、扶正培本法等：三是单味中草药治疗，如以雷公藤、清风藤、马钱子等药的药物成分研究开发为代表进行抗风湿治疗。中医药治疗类风湿性关节炎既有抗炎镇痛作用又具备免疫抑制及免疫调节效应，体现出整体调节、多环节、多途径的特点。但缺乏公认的大样本临床疗效资料，且口服药物多存在毒副作用的情况有待解决。本研究课题是以导师李彦民主任医师的经验方仙龙颗粒为基础和依据，探讨其治疗类风湿性关节炎的疗效和作用机理。在已有研究的基础上，通过测定仙龙颗粒对佐剂性关节炎大鼠血清中ＩＬ．１含量的影响，从免疫学角度进一步探讨其作用机理。仙龙颗粗对佐荆性关节炙大鼠血清１Ｌ－１含量的影响实验研究１．材料与方法１．１实验材料１．１．１实验动物：清洁级大鼠４８只，雌雄各半，体重２００＿＿．２０９，固体颗粒鼠饲料两箱，均由第四军医大学实验动物中心提供，医动字第０８—０１５号。１．１．２药品及试剂：仙龙颗粒：由威灵仙、秦艽、制川乌、细辛、穿山龙、乌稍蛇等组成，以上药物均购自陕西中医学院国医堂，经陕西中医学院药物研究所鉴定，符合２０００年《中华人民共和国药典质检标准》。加工成颗粒剂型，用蒸馏水分别配制成０．６９／ｍｌ、１．８９／ｍｌ、５．４９／ｍｌ（均按人鼠给药比例换算成常规剂量后配制），置冰箱４＂Ｃ储存备用。强的松片：由西安制药厂提供，规格为５ｒａｇ／片，批号：０５１１２１１３３。用蒸馏水配置成０．３ｍｇ／ｍｌ。完全弗氏佐剂：由陕西生物制品研究所提供，批号大鼠ＩＬ－ｔ放免试剂盒：由北京福瑞生物工程公司提供，批号：２００６１０２５１．１．３主要实验器械：放射免疫检测仪（ＳＮ．６９７ＢＧＡＭＭＡＣＯＵＮＴＥＲ）超低温冰箱（ＭＤＦ．３８１Ｅ，日本ＳＯＮＹＯＯ公司制造）１．２实验方法１．２．１动物分组：４８只大鼠购回后适应性喂养一周，然后随机分为６组，具体如下：Ａ组：空白对照组（简称：空白组）Ｂ组：模型对照组（简称：模型组）Ｃ组：强的松对照组（简称：强的松组）Ｄ组：仙龙颗粒小剂量治疗组（简称：小剂量组）Ｅ组：仙龙颗粒中剂量治疗组（简称：中剂量组）Ｆ组：仙龙颗粒大剂量治疗组（简称：大剂量组）１．２．２佐剂性关节炎造模：陕西中医学院２００７届硕士学位论文除Ａ组外，于Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ组每只大鼠右后足跖皮内注射弗氏完全佐剂Ｏ．１ｍｌ。１．２．３给药：造模后第２天开始灌胃给药，每只大鼠每次灌胃量为２ｍｌ，每天一次。Ａ、Ｂ两组给以蒸馏水，Ｃ组给以强的松液，Ｄ、Ｅ、Ｆ组分别给以仙龙颗粒小、中、大剂量溶液，连续给药２８天。１．２．４标本采集：连续给药２８天后，将大鼠摘眼取血４～５ｍｌ，不抗凝，装入清洁试管备用。１．２．５检测指标：分别按试剂盒方法测定血清ＩＬ．１含量（由陕西中医学院检验科协助完成）。１．２．６统计学处理：各组数据均以均数±标准差（ｘ±ｓ）表示，各组间差异用ＳＳＰＳ１Ｉ软件包进行ｔ检验。２．实验结果２．１一般形态观察大鼠于造模后约１２小时，注射局部开始出现红肿，皮温升高：第４天足跖肿胀达高峰，之后逐渐消退；于造模后第ｌｌ天出现继发性炎症反应，第１２￣２８天发生广泛性炎症反应，鼠尾、耳、足跖、后肢及未注射的前肢均出现水肿、血管周围炎；第２１天达高峰，出现摄食减少，竖毛，倦怠嗜卧，跛行，耳廓充血，皮下结节。空白组大鼠无异常变化。仙龙颗粒组与强的松组大鼠上述症状均有不同程度的改善。而模型组症状未见改善。２．２仙龙颗粒对于ＡＡ大鼠血清ＬＩ．１影响的统计学处理结果仙龙颗粒对于矗矗大鼠血清ＬＩ一１的影响（一Ｘ士ｓ，ｐｇ／ｍｉ）仙龙颗粒对佐剂性关节炎大鼠血清ＩＬ－１舍量的影响★与Ａ组比较Ｐ＜Ｏ．０５；▲与ｃ组比较Ｐ＜Ｏ．０５☆与Ｂ组比较Ｐ＜Ｏ．０５＃与Ｃ组比较Ｐ＞Ｏ，０５结果显示：与Ａ组比较，Ｂ、ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ组大鼠血清ＩＬ．１含量均有显著性升高（Ｐ＜０．０５），结合肉眼观察所见的病理改变，表明造模成功。与Ｂ组比较，Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ组，大鼠血清ＩＬ．１有显著性降低（Ｐ＜Ｏ．０５），说明强的松和仙龙颗粒各剂量均能改善ＡＡ大鼠的免疫功能异常状态，对ＲＡ有治疗作用。与Ｃ组比较，Ｄ、Ｅ组有显著性差异（Ｐ＜０．０５），Ｆ组与Ｃ组比较，无显著性差异（Ｐ＞０．０５），说明仙龙颗粒中、４，Ｎ量较强的松作用为弱，仙龙颗粒大剂量与强的松作用相似。陕西中医学腕２００７届硕士学