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精品论文 参考文献 6-OHDA单侧两点损毁建立PD模型 柯璐琳 （福建医科大学附属第一医院药学部 福建福州 350005） 【摘要】 目的：建立一种稳定的帕金森大鼠模型制备方法，并对其进行评价。方法：利用脑立体定位仪在大鼠单侧前脑内侧束及黑质注射6-羟多巴胺（6-OHDA）溶液（12mu;gbull;4mu;L-1），两周后，腹腔注射阿扑吗啡(APO) (1mgbull;kg-1)，观察大鼠旋转情况，以向健侧、首尾相接、环曲360deg;计一圈，记录5min，若gt;7rbull;min-1（完全毁损）视为建模成功；若lt;7rbull;min-1（部分毁损）及15min无旋转或向损毁侧旋转均视为建模失败。结果：建立成功PD模型，成功率为27.5％。结论：6-OHDA单侧两点法是一种稳定的建立大鼠PD模型方法。 【关键词】6-OHDA 帕金森模型 【中图分类号】R965 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2013）30-0377-02 帕金森病是中老年人常见的慢性中枢神经系统退行性疾病，其发病机制为黑质多巴胺能神经元变性、缺失，纹状体DA含量显著降低，造成兴奋性神经递质乙酰胆碱功能相对亢进。 目前最常用的大鼠PD模型是通过将6-OHDA注入脑内黑质纹状体，损毁多巴胺能神经元制备。6-OHDA对大脑黑 质-纹状体系统的损毁常选择单侧，因为双侧6-OHDA损毁，往往出现吞咽不能、渴感缺乏及运动不能等导致动物的死亡率极高。损毁选用的位点包括黑质致密部，内侧前脑束，尾状壳核复合体和侧脑室等。6-OHDA损害所致的大鼠PD模型最常用的行为学评价方法是阿朴吗啡诱发旋转实验。本实验采用6-OHDA单侧两点损毁建立PD模型，并利用APO诱发旋转试验进行筛选。 1 仪器与材料 1.1 动物 SD雄性大鼠，体重250-280g，购自中国科学院上海实验动物中心，光暗周期12/12 h(光照时间8:00-20:00)下饲养。 1.2 仪器 AE-240电子天平（梅特勒-托利多仪器有限公司），pHS-3C型pH计（上海雷磁仪器厂），脑立体定位仪（美国STOELTING公司），CMA/150温控垫（瑞典CMA公司）。 1.3 试剂 6-OHDA标准品（美国SIGMA公司），APO标准品（美国SIGMA公司）其它试剂均为分析纯。 2 方法与结果 2.1 6-OHDA单侧两点损毁PD模型的建立 精密称取6-OHDA 0.0012g，将其溶解于400mu;L含0.2%抗坏血酸的生理盐水中，配制成终浓度为3mu;gbull;mu;L-1的6-OHDA溶液，置-20℃避光保存。 大鼠腹腔注射10%水合氯醛麻醉后（4mLbull;kg-1），将其头部固定于脑立体定位仪，碘酒酒精消毒头部皮肤，剪开头皮，用3%H2O2烧灼并充分暴露颅骨及前囟位点，读取前囟坐标并记录，根据大鼠脑立体定位图谱[2]，选取右侧黑质致密部与前脑内侧束两点以7号针头钻孔并分别注射6-OHDA 溶液4mu;L。注射时先以1.0mmbull;min-1缓慢进针，插至目标深度后停针约3min待动物适应，以1mu;Lbull;min-1缓慢注射6-OHDA液，并留针约5min待液体弥散吸收，再以1.0mmbull;min-1缓慢退针。局部撒少量青霉素，缝合伤口，待动物清醒后放回笼中静养。每日腹腔注射青霉素（0.5MLbull;5万单位）。 2.2 筛选成功PD模型 2.2.1 行为学检测 精密称取0.0096g APO，将其溶解于9.6mL含0.2%抗坏血酸的生理盐水中，即得终浓度为1mgbull;mL-1的APO溶液。 大鼠经6-OHDA损毁两周后，在黑暗安静的环境下腹腔注射APO溶液(1mgbull;kg-1)，单独置于笼内，观察其行为变化，5min后开始计算旋转圈数，以向健（左）侧、首尾相接、环曲360deg;者计一圈，记录5min，若旋转gt;7rbull;min-1或gt;35rbull;5min-1（完全毁损）视为建模成功；旋转lt;7rbull;min-1或lt;35rbull;5min-1（部分毁损）及15min无旋转或向右侧旋转者均视为建模失败。 2.2.2 形态学观察 取造模成功大鼠，大鼠腹腔注射10%水合氯醛麻醉后（4mLbull;kg-1），断