HLA-B27基因在云南汉族白血病中的研究.docVIP

精品论文 参考文献 HLA-B27基因在云南汉族白血病中的研究 梁艳丽1 何 勤2 王旭2（1 四川遂宁市中心医院629000；2 四川昆明医学院第二附属医院血液科 650101） 【中图分类号】R733.7 【文献标识码】A 【文章编号】1672-5085 (2010)35-0010-03 【摘要】 目的 探讨HLA-B27基因与云南汉族白血病患者的关联性。 方法 运用序列特异性引物聚合酶链反应（PCR-SSP）扩增方法检测26例云南昆明汉族白血病的患者HLA-B27基因的分布，对照组为62例来自云南昆明汉族无血缘关系的健康者。结果 26例白血病患者中，HLA-B27基因阳性为1例，占3.8%；在62例对照组中，有3例为阳性，占4.8%。两者无明显差异。结论 研究没有发现HLA - B27基因与云南汉族白血病具有相关性，也没有发现HLA-B27基因在本组白血病患者与正常健康人中的分布有差异性，这可能与白血病的复杂的发病机制，分类较多及人群地理分布及样本量有关。 【关键词】 HLA-B27基因 云南汉族白血病 人类白细胞抗原 人类白细胞抗原（human leukocyte antigen，HLA）复合体是位于第6号染色体短臂（6p21.31）的一组紧密连锁的基因群，DNA长度约3600kb。HLA-B27抗原为HLA-Ⅰ类基因B座位上的抗原，是一组紧密相关的组织相容性抗原。1973年Brewerton报道了HLA-B27与强直性脊柱炎(ankylosing spondylitis，AS)病因及发病机制密切相关[1]。近几年来，研究发现HLA与白血病亦有相关性。白血病是一类造血干细胞的恶性克隆性疾病,到目前为止，该病的确切发病机制尚不清楚。多数学者认为，白血病是由物理、化学、生物及遗传等多方面因素共同作用的结果。据文献报道[2]，具有高度多态性并与抗原呈递和识别有关的HLA分子，可能是导致白血病的重要遗传因素之一。HLA-B27基因与白血病是否有关联性，关联性如何，我们将通过建立序列特异性引物聚合酶链反应（PCR-SSP）方法对HLA-B27基因与云南汉族白血病患者的关联性进行初步探讨。 1 材料和方法 1.材料 1.1 病例组 昆明医学院第二附属医院血液科临床确诊为白血病的患者，共26例。其中男性12例，女性14例，年龄5～70岁，平均年龄42岁。急性髓细胞白血病（AML）11例，急性淋巴细胞白血病（ALL）8例，慢性髓细胞性白血病（CML）3例，慢性淋巴细胞性白血病（CLL） 3例，急性双表型白血病1例。 1.2对照组 云南昆明汉族健康群体62例,其中男性31例，女性31 例，年龄14～75岁，平均年龄44岁。 1.3标本要求 所有患者均进行了血常规、外周血涂片分类、骨髓细胞学、组织化学染色、骨髓病理学、白血病细胞免疫分型及染色体核型等检查，部分患者进行了融合基因检测。 1.4 主要试剂 PCR反应试剂 10times;PCR Buffer，2times;GC BufferⅠ，rTaq酶，La Taq酶 均购自中国大连Takara Biotech公司 2. 方法 2.1 样本DNA的提取 血样处理：抽取静脉血5-6ml，置于无菌真空管中，EDTA抗凝，用传统酚/氯仿抽提法 2.2 DNA浓度测定 取10ul ddH2O中，使用紫外分光光度仪检测每份DNA溶液的OD280值，计算OD260/OD280，比值在1.7-1.9范围内为正常（浓度约为0.2-2.4ug/ul）。 2.3 PCR反应 根据序列特异性引物扩增法（PCR-SSP）设计HLA-B27基因的引物序列[13]，然后进行HLA-B27基因片段的扩增。具体如下： （2）扩增HLA-B27基因片段 ①引物序列：上游引物为：5rsquo;GCT ACG TGG ACG ACA CGC T 3rsquo;，下游引物1为：5rsquo;CTC GGT CAG TCT GTG CCT T 3rsquo;，下游引物2为：5rsquo;TCT CGG TAA GTC TGT GCC TT 3rsquo;。 ②PCR反应体系：10times;PCR Buffer(Mg2+ Plus) 2.5ul，dNTP Mixture(各2.5mM) 2.0ul，上下游引物（25ummol/L）0.5ul，模板DNA（25ng/ul）0.5ul，TaKaR