5,7-二甲氧基黄酮经PTENPPARγ信号通路诱导人肝癌细胞凋亡的研究.docVIP

精品论文 参考文献 5,7-二甲氧基黄酮经PTENPPARγ信号通路诱导人肝癌细胞凋亡的研究 1罗祎敏 2曹建国 1. 南华大学医学院 湖南衡阳 421001；2. 湖南师范大学医学院 湖南长沙 410006 【摘要】目的：为研究DMF对HepG2细胞凋亡相关蛋白PPARgamma;、PTEN、PTEN和caspase-3表达和活性的影响，方法：本研究用终浓度分别为1.0，4.0，16.0 mu;M的DMF处理HepG2细胞24 h以诱导其发生凋亡，再采用Western-blot法对凋亡细胞中的PPARgamma;、PTEN、PTEN和caspase-3表达情况进行了研究。结果：PPARgamma;、PTEN和caspase-3在HepG2细胞中表达上调，并具有剂量依赖性，而p-AKt的表达受到抑制，也呈剂量依赖性。结论：DMF抗人肝癌作用机制可能是通过活化PPAR gamma;，上调PTEN蛋白表达和活性，进而抑制p-AKt活性，促进caspase-3的活化，诱导HepG2细胞凋亡。 【关键词】5，7-二甲氧基黄酮；HepG2；生长抑制 【中图分类号】R473 【文献???识码】A 【文章编号】2096-0867（2016）11-061-01 肿瘤作为威胁人类生命安全的最主要疾病之一，随着环境的不断恶化，其发病率不断上升[1]。2012年，全国登记地区恶性肿瘤死亡率（粗率）为180.54/10万，中国人口标化率为85.06/10万，累计率（0～74岁）为我国居民因癌死亡的几率为12.94%[2]。因此，开发肿瘤治疗药物是一个重要的医学课题。 1 材料和方法 1.1 材料 人肝癌HepG2细胞购于中国典型培养物中心(中国武汉市)；DMF由湖南师范大学医学院药学系药物化学室合成；白杨素(ChR)购自美国Sigma公司；1640培养基购自广州英韦创津生物科技有限公司；新生小牛血清购自美国Gibco公司；DMSO等均为Sigma公司产品。 1.2 方法 1.2.1 细胞培养 HepG2细胞采用1640培养液，于37℃、5% CO2培养箱中培养，并加10%胎牛血清。待细胞生长至对数生长期时，进行下游实验。 1.2.2 诱导细胞凋亡 取对数生长期Hep G2细胞，分别加入含终浓度1.0、4.0、16.0 mu;M的DMF和16.0 mu;M的ChR，溶媒对照组加入相同体积终浓度为0.2%DMSO的完全培养基，培养24 h后收集细胞。 2 结果 2.1 Western-blot检测DMF对肿瘤细胞（HepG2）PPARgamma;表达的影响 许多研究表明PPARgamma;在肿瘤组织中呈上调表达，PPARgamma;特异配体能诱导多种肿瘤细胞凋亡。DMF具有明显诱导HepG2细胞凋亡的作用，而PPARgamma;蛋白的表达变化在肿瘤细胞凋亡机制中发挥着极其重要的调控作用，许多物质都可通过活化PPARgamma;导致细胞凋亡。 为探讨DMF诱导HepG2细胞凋亡机制，我们采用Western blot进一步分析它的表达状况，结果表明，经1.0、4.0、16.0 mu;M的DMF处理24 h后，随着DMF浓度的增高，PPARgamma;表达呈上升趋势，与对照组相比，分别上调1.8%，7.47 %，15.23%。 2.2 Western-blot检测DMF对肿瘤细胞（HepG2）肿瘤抑制基因PTEN表达的影响 PTEN是一种抑癌基因，其突变或缺失常常导致肿瘤的发生。大量研究表明，通过对PPARgamma的活化，导致PTEN表达上调。本实验结果发现：经1.0、4.0、16.0 mu;M的DMF处理24 h后，随着DMF浓度的增高，PTEN表达较对照组相应上调1.73%，4.7%，13.23%。这提示DMF通过活化的PPAR gamma;促进了肿瘤抑制基因PTEN的表达。 2.3 Western-blot检测DMF对肿瘤细胞（HepG2）p-AKt表达的影响 蛋白激酶B (Protein kinase B， 简称PKB 或Akt)是丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶家族成员，它包括磷酸化和去磷酸化两种状态，磷酸化是其活化状态。研究表明，白杨素诱导U937白血病细胞凋亡与caspase-3的活化和AKt的灭活有关；本实验Western-blot结果发现：经1.0、4.0、16.0 mu;M的DMF处理24 h后，随着DMF浓度的增高，p-AKt表达呈下降趋势，分别较对照组下调了6.9%，9.83%和15.4%。这证明DMF诱导HepG2细胞凋亡，与其对AKt的灭活有关。 3讨论 许多研究表明PPARga