诱导分化剂FSK88对癌细胞凋亡及信号调控的相关性研讨.pdfVIP

诱:r分化剂FSK88对痛细胞凋亡及信 ;jA.控的相关性研究 摘 要 FSK88是本实验室近年来发现的一种新抗癌化合物，研究表明它具有诱导多 种肿瘤细胞向正常细胞逆转分化的作用，而且毒副作用极微。因此从FSK88对 各种体外培养肿瘤细胞 (大鼠成骨肉瘤细胞株UMR106，人胃癌细胞BGC-823及 单核细胞系U937细胞)的作用入手，研究了FSK88对癌细胞增殖、对’rcF-田 基因表达以及应用流式细胞仪分析了对细胞周期、线粒体膜电位的影响以及诱 导肿瘤细胞凋亡的途径，同时应用MTT试验分析了对肿瘤细胞的活性的影响以 及应用PT/Hoehst33342联染对染色质凝集的影响，以期对 FSK88的抗肿瘤作用 有进一步的认识。 本文以大鼠成骨肉瘤细胞UMR106、人胃癌细胞BGC-823、单粒血细胞癌细胞 U937等为体外培养实验模型。采用DNA电泳技术、MTT还原测试技术、荧光显 微技术、流式细胞仪分析技术、RT-PCR以及Westernblot、酶联免疫印迹技术， 研究了FSK88对癌细胞形态活力以及对线粒体膜电势、染色质凝集、细胞周期 的影响以及诱导癌细胞凋亡。并且研究了FSK88对细胞周期检查点P53的调控 作用以及对凋亡细胞的分子标志TGF-甲基因表达的影响。 实验结果显示用 1X10-MFSK88处理人胃癌细胞 BGC-82372hr后，其细胞 形态发生了明显变化。细胞收缩，变圆。应用荧光染料碘化丙锭 PI以及 Hoehst3:3324联染，发现可诱导BGC-823以及U937细胞染色质凝集。提取DNA, 进行琼脂糖凝胶电泳分析发现出现了DNAladder，可以诱导细胞凋亡:用50uM FSK88连续处理72hr的BGC-323及U937细胞，进行流式细胞仪分析发现线粒 体膜电位下降以及细胞周期停滞于GUS期。UMR106细胞经1X10一0M.FSK88处 理96hr后，提取总RNA，用TGF-3(1引物进行RT-PCR扩增，凝胶成像分析， FSK88组TGF-困表达上调了23.18%。把BGC-823细胞接种于96孔板，经1x 1()M.FSK88处理96小时后，用MTT染色，5%C02,37℃于培养箱过夜，然后用 DMSO溶解，550nm于酶标仪测定，发现 FSK88明显的降低了癌细胞活性。用 Western--Blot测定了经 IX10-MFSK88处理 72hr后BGC-823细胞中P53蛋白 表达的变化，与对照组相比，FSK88明显上调了P53的表达。 关键词:诱导分化剂:TGF-pI:细胞凋亡;细胞周期;线粒体膜电位 诱睁分化剂FSK88对痛细胞凋亡及信号调控的相关性研究 MechanismofInduced--DifferentiativeReagentFSK88onInducingTumor Cell’sApoptosisartdItsEffectonGeneEpxressionad Sig-iaIirugPattvay Regulation LiZhonghai(majoringincellbiology) DirectedbyProfessorWangJingZe Abstract: FSK88isanegativeregulatorofcellgrowth.Itisisolatedandpurifiedfroma kindofChinesetropicalplants:Coleusforskohlii.Itcanstronglyinhibitthe proliferationofmalignantcellsandstimulatethemtodifferentiatetonormalcells.It hasonlyaslighttoxicsideeffect.Weusedcancercells(UMRl06,BGC-823,U937) astheexperimentalcellmodelstostudythemechanismofFSK88onthecancer. ThemorphologicalchangesofhumangastricBGC-823cellstreatedby1X10-4M