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医学论文-5-氮杂胞苷对乳腺癌细胞RASSF1A甲基化状态及其基因表达的影响 【摘要】? 目的 探讨5-氮杂胞苷对人乳腺癌细胞Bcap-37细胞增殖的抑制作用及作用机制。方法 在乳腺癌细胞株MCF-7和Bcap-37中，应用甲基化特异性PCR（MSP）进行RASSF1A基因甲基化检测。检测5-氮杂胞苷前后RASSF1A基因甲基化、非甲基化状态的改变和检测RASSF1A基因的mRNA表达。结果 人乳腺癌细胞株MCF-7和Bcap-37中RASSF1A基因启动子区高甲基化。5-氮杂胞苷作用4天后，对Bcap-37细胞的RASSF1A基因有去甲基化作用，且mRNA表达明显增强。结论 RASSF1A基因启动子区在乳腺癌细胞中发生异常甲基化；5-氮杂胞苷能较好地逆转Bcap-37细胞RASSF1A基因异常甲基化，诱导RASSF1A基因的表达。 【关键词】? 乳腺癌细胞 RASSF1A基因 基因甲基化 5-氮杂胞苷 甲基化特异性PCR（MSP） ??? 【Abstract】? Objective? Inhibitory effect of 5-azacytidine on the proliferation of human breast cancer cell line Bcap-37 and its mechanism was investigated.Methods? Using cell line MCF-7 and Bcap-37,the status of methylation of RASSF1A(RAS association domain family1A)gene was investigated by methylation special PCR(MSP),The methylation and unmethylation status of RASSF1A were detected by MSPand RASSF1A mRNA expression was detected by RT-PCR.Results? Hymethylation of RASSF1A promoter was investigated in human breast cancer cell line MCF-7 and Bcap-37.After treatment with 5-azacytidine(5μmol/L),the demethylation of RASSF1A gene occurred and RASSF1A mRNA expression was incressed.Conclusion? Hymethylation of RASSF1A promoter was found in human breast cancer.5-Azacytidine may effectively enhance RASSF1A gene demethylation and enhance the expression of RASSFIA mRNA. ??? 【Key words】? breast cancer cell;RASSF1A Gene;Gene Methylation;5-Azacytidine;methylation special PCR ??? 乳腺癌是由乳腺导管上皮发生的恶性肿瘤，是妇女的常见恶性肿瘤之一。乳腺癌的发生机制尚不清楚。RASSF1（RAS associated domain family gene 1,RAS相关结构域家族基因1）是一种与肿瘤相关的基因，定位于染色体3p21.3，编码一组RAS效应蛋白［1］。使用不同的剪接和启动子，RASSF1基因形成三个主要的转录因子，即RASSF1A、RASSF1B和RASSF1C。RASSF1A在正常组织中广泛表达，但在肺癌、膀胱癌等多种肿瘤组织中却出现表达缺失［2］。我们应用5-氮杂胞苷对乳腺癌细胞Bcap-37进行处理，观察抑癌基因RASSF1A的甲基化状态、mRNA转录表达及细胞生物学特性的改变，以期进一步探讨乳腺癌的发生机制并寻找乳腺癌治疗的新方法。 ??? 1? 材料与方法 ??? 1.1? 肿瘤细胞? 人乳腺癌细胞系Bcap-37、MCF-7、人乳腺上皮细胞HBL-100由中科院上海细胞所提供。 ??? 1.2? 试剂与仪器? 5-氮杂胞苷（5-azacytidine)、亚硫酸氢钠、氢醌为Sigma公司产品，DNAzol Reagent为Invitrogen公司产品，Trizol为Gibcol公司产品，TaqDNA酶、MMV Reverse Transcription Kit为Permentas公司产品。 ??? 1.3? 实验方法 ???