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2013.05.29(浙江）郑小玲--非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法
非无菌产品微生物限度检查：微
生物计数法
浙江省食品药品检验研究院
郑小玲
主要内容
1 计数方法的概况
2 计数培养基适用性检查
3 供试品计数方法适用性检查
4 供试品检查
5 结果判断
计数方法的概况
有氧条件下生长的嗜温细菌和真菌的计数
平皿法
不适用活菌制剂的检查 薄膜过滤法
MPN法
受控环境洁净环境下的局部洁净度不低于B级
确认方法的适用性
可采用替代方法
计数方法的概况
需氧菌总数（TAMC) ：
细菌数：营养琼脂培养基， 修订后 胰酪大豆胨琼脂（TSA ），
30～35℃，3天
胰酪大胨肉汤（TSB ）
30～35℃，3～5天
霉菌和酵母菌数：玫瑰红
钠琼脂培养基，20～28 ℃，
霉菌和酵母菌总数（TYMC) ：
5天。酵母菌计数：酵母浸出
沙氏葡萄糖琼脂培养基，
粉胨葡萄糖琼脂
20～25 ℃，5～7天
计数培养基适用性检查
• 菌种及菌液制备
菌种：标准菌株(CMCC)，传代次数不超过5代
金葡、铜绿、枯草、白念、黑曲
菌液制备：用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠
溶液制菌悬液。
菌液制备后室温放置，2小时内使用；2～8℃，24小时内使用。
黑曲霉孢子悬液可保存在2～8℃，在验证过的贮存期内使用。
• 阴性对照
以稀释剂进行阴性对照组，应无菌生长
计数培养基适用性检查
TSA、TSB、SDA：
1、实验用菌株：TSA:金葡、铜绿、枯草、白念、黑曲
TSB ：金葡、铜绿、枯草
SDA:白念、黑曲
2 、接种：TSA、SDA:涂布法、倾注法。TSB ：直接接入
接种量不大于100cfu，细菌30～35℃培养不超过3天，真菌20～
25 ℃培养不超过5天。
每一试验菌株平行制备2管或2个平皿。
对照培养基替代被检培养基同法操作。
3、TSA、SDA与对照培养基比较，回收率为50%～200%，菌落形态
与对照培养基一致。TSB与对照培养基比较，试验菌应生长良好。
玫瑰红钠培养基、SDA+抗生素、选择性培养基
计数方法适用性检查
供试液制备
1.液体供试品 1.水溶性供试品
2. 固体、半固体或黏稠性 2.水不溶性非油脂类供试品
供试品 修订后 3.油脂类供试品
3.需用特殊方法制备供试液 4.需用特殊方法制备供试液的
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