(食品微生物检验)0301 第三篇 章 食品微生物检验基础.ppt

第三章 食品微生物检验基础;Contents;第一节 细菌学检验基础;一、无菌技术;（一）什么是无菌技术;2、超净工作台; （三）无菌器材;（四）无菌操作;2、进入无菌室前的准备;3、检验操作过程的无菌操作要求;无菌操作 – 取菌技巧 1;2. 试管前端过火;4.试管倾斜，放入接种环;5.试管前端过火，盖上试管盖;2. 自 Plate 上取单一菌落 (方法一：盖子微开遮住培养基，避免空气中菌体掉入);1.挤出吸球内空气，插上灭过菌的玻璃吸管;调整微量加样器 刻度 (吸取范围 200 ~ 1000μl);3. 按钮压至第一段（不可压至最底）;5. 慢慢释放按钮，即可 吸取液体;1.试管前端过火;方法一：以接种环沾菌，放入新的培养基中接菌;无菌操作;操作时离酒精灯外焰区太远;无菌操作 – 错误示范;无菌操作 – 错误示范;注意事項 – 生物性废弃物;二、微生物的接种与分离技术;（一）接种;１、接种工具和方法;2.常用的接种方法有以下几种： ;５）涂布接种 ６）液体接种 ７）注射接种 ８）活体接种 ;(二) 分离纯化;１.倾注平板法;２.涂布平板法;３.平板划线法; 平板划线法： 1、倒平板，标记培养基名称，编号和实验日期。 2、划线方法 　　 ;三、细菌培养方法 由于细菌的种类不同，对培养条件的要求也就不同，细菌对培养条件的要求包括温度和气体。由于大多数细菌所需的温度均是35～37℃，所以细菌的培养方法仅以细菌对气体需求不同进行分类。据此可将细菌培养分为三种，即需氧培养法、CO2培养法、厌氧培养法。 ;;;二氧化碳培养箱;;二氧化碳培养法;;;厌氧培养箱;四、细菌的生长现象 (一)细菌在固体培养基上的生长现象 1．细菌在营养琼脂平板上的生长现象 细菌经一定时间培养后，在固体培养基表面所形成的，肉眼可见的物体（群落），称为菌落。 一个单一的菌落原则上是由一株细菌生长繁殖而成，其特征代表了该菌种细菌的特性。 观察的方法是将平皿培养物放在自然光或白炽灯光的前面，从不同角度进行观察。;菌落形状：圆形、不整形、扁平、凸起、凹面 菌落大小：以mm计算。 表面性状：光滑、粗糙、有无光泽等。 边缘情况：整齐、不整齐、锯齿状等。 颜 色：无色、白色、黄色???灰色等。 透 明 度：不透明、透明、半透明等。 质 地：硬、软、脂状、磨状等。 粘 度：奶油状、黏液状、膜状易碎等。 乳 化 性：指在生理盐水中，将一菌落在盐水中研磨形成均匀乳状或颗粒状的程度。;菌落形态学Bacterial Colony Morphology ;有荚膜的细菌菌落较大并且表面光滑，而没有荚膜的则表面较粗糙； 具有芽孢的细菌菌落表面常有褶皱并且不透明。 没有鞭毛不运动的细菌，特别是球菌，常形成较小、较厚、边缘较整齐的菌落；有鞭毛的细菌则较大而扁平，边缘波状、锯齿状等；;;光滑型菌落;单增李斯特氏菌在普通计数琼脂平板上的菌落;;;;菌落;菌落周围 无混浊白环;;;;;液体培养物的观察;;斜面培养物的观察;;在培养物中加入某种底物与指示剂，经接种、培养后，观察培养基的PH值变化。 在培养物中加入试剂，观察它们同细菌代谢产物所生成的颜色反应。 根据酶作用的反应特性，测定酶的存在。 根据细菌对理化条件和药品的敏感性，观察细菌的生长情况。;生化试验的注意事项;（一）糖类代谢试验 （二）氨基酸和蛋白质代谢试验 （三）有机酸盐和铵盐代谢试验 （四）酶类试验;;常用的糖、醇;;气泡;;糖酵解试验 ;记录： 产酸不产气，阳性，以“+”表示 产酸产气，阳性，以“⊕”表示 不产酸产气，阴性，以“-”表示;;;;2. 甲基红(MR)试验 原理 某些细菌分解葡萄糖的过程中产生丙酮酸，丙酮酸进一步被代谢成为乳酸，乙酸，甲酸等。使培养基的pH下降至4.5以下，加入甲基红指示剂出现红色为阳性；有些细菌分解葡萄糖产酸量少，或产生的酸进一步转化为其他物质，最终的酸类较少，培养基pH较高，加入甲基红指示剂呈黄色为阴性反应。 因此该试验是检查细菌发酵葡萄糖产生并保持稳定的酸性终末产物和克服体系缓冲作用的能力，某些细菌比其他细菌能够产生更多的酸。;;;3. 伏普试验(V-P试验) 某些细菌在葡萄糖蛋白胨水培养基中能分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸缩合，脱羧成乙酰甲基甲醇，后者在强碱环境下，被空气中氧氧化为二乙酰，二乙酰与蛋白胨中的胍基生成红色化合物，称V-P（+）反应。;;;;;;;;;1.靛基质（Imdole）试验;;靛基质试验照片 ;;;制好的培养基;;;尿素酶试验图 ;1、未接种 2、尿素酶阳性 3、尿素酶阴性;4. 明胶液化试验 原理 某些细菌产生明胶酶可使明胶分解，失去凝固力，使其由半固体转化为液体状态。天然存在的蛋白质分子太大不能进入菌体细胞，因此