(食品微生物检验)0502 葡萄球菌讲解材料.pptVIP

第二节 食品中致病性球菌的检验 一、金黄色葡萄球菌的检验 葡萄球菌在自然界分布极广，空气、土壤、水、饲料、食品（剩饭、糕点、牛奶、肉品等)以及人和动物的体表粘膜等处均有存在，大部分是不致病的腐物寄生菌，也有一些致病的球菌。 食品中生长有金黄色葡萄球菌，是食品卫生的一种潜在危险，因为金黄色葡萄球菌可以产生肠毒素，食后能引起食物中毒。因此，检查食品中金黄色葡萄球菌有实际意义。 （一）形态与染色 典型的葡萄球菌呈球形，直径0.4µm-1.2µm，致病性葡萄球菌一般较非致病性菌小，且各个菌体的大小及排列也较整齐。细菌繁殖时呈多个平面的不规则分裂，堆积成为葡萄串状排列。 在液体培养基中生长，常呈双球或短链状排列，易误认为链球菌。葡萄球菌无鞭毛及芽胞，一般不形成荚膜，易被碱性染料着色，G+，当衰老、死亡或被白细胞吞噬后常转为革兰氏阴性，对青霉素有抗药性的菌株也为革兰氏阴性。 (二)分类 葡萄球菌属于微球菌的葡萄球菌属，葡萄球菌种类繁多，以往的分类方法是以菌落色素将葡萄球菌分为金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌和柠檬色葡萄球菌三种。 但是这种色素指标很不稳定。 根据《伯杰氏鉴定细菌学手册》第八版，按葡萄球菌的生理化学组成，将葡萄球菌分为金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌三种。 其中金黄色葡萄球菌多为致病性菌，表皮葡萄球菌偶尔致病，腐生葡萄球菌一般为非致病菌。 通常使用的基本分型噬菌体有22型，根据它们对菌株的裂解反应，可将金黄色葡萄球菌分成以下几群： I群：29、25、52A、79、80； II群：3A、3B、3C、55、71； III群：6、7、42E、47、53、54、75、77、83A； IV群：42D。 (三)培养特性 营养要求不高，在普通培养基上生长良好。需氧或兼性厌氧，最适生长温度为37℃，最适pH值为7.4。 在普通营养琼脂平板上，培养24h-48h后，可形成圆形、凸起、边缘整齐、表面光滑、湿润、有光泽、不透明菌落。菌落直径通常在1mm-2mm，但也有大至4mm-5mm者。 金黄色葡萄球菌形态 金葡在Baird-Parker平板上菌落直径2-3mm，灰色到黑色，边缘淡色，周围有一浑浊带，外层有一透明圈。接种针接触有奶油至树脂硬度。偶见非脂肪溶解的类似菌落耽误浑浊带和透明圈。 触媒实验↓ 电镜下的金葡 海博显色培基 可产生不同色素，如金黄色、白色及柠檬色，这些色素为脂溶性，能溶于醇、乙醚、氯仿及苯等有机溶剂中，因不溶于水，故色素只限于培养物，而不外渗至培养基中。 色素的形成依培养条件而异：通常在22℃产生色素较多；于37℃培养后，再置室温1d-2d，色素产生明显；在固体培养基中含有碳水化合物、牛乳或血清等，色素形成最好，有O2及CO2环境下易形成色素，而在无O2环境中不形成色素。 耐盐性强，在含5％-10％的氯化钠培养基中能生长，在含有20％-30％二氧化碳的环境中培养，可产生大量的毒素。 在肉汤培养基中生长迅速，37℃24h培养后，呈均匀混浊生长，延长培养时间，管底出现少量沉淀，轻轻振摇，沉淀物上升，旋即消散，培养2d-3d后可形成很薄的菌环，在管底则形成多量粘稠沉淀。 在血琼脂平板上，形成的菌落较大，多数致病性菌株可产生溶血毒素，使菌落周围产生透明的溶血圈( β溶血)。 (四)生化特性 本属细菌大多数不能分解乳糖、葡萄糖、麦芽糖、蔗糖。产酸不产气。 致病菌株能分解甘露醇，产酸。甲基红阳性，V—P为弱阳性，多数菌株能分解尿素产氨，还原硝酸盐，不产生吲哚。 (五)毒素与酶 葡萄球菌的致病力决定于细菌产生的毒素和酶的能力。 溶血毒素、杀白血球毒素、肠毒素、 血浆凝固酶、溶纤维蛋白酶、透明质酸酶、脱氧核糖核酸酶 1、溶血毒素 多数致病菌株能产生该毒素，使血琼脂平板菌落周围出现溶血环，在试管中出现溶血反应。 溶血毒素是一种外毒素，根据其对动物细胞的溶血范围、抗原性、溶血时所需温度等不同可分为α、β、γ、δ四种，其中以β溶血素为主。 2、杀白血球毒素 能破坏人或兔的白细胞和巨噬细胞，使其失去活性，最后膨胀破裂。 致病性与非致病性葡萄球菌都能被吞噬细胞吞噬，非致病性菌株在白细胞内很快被杀死，而致病菌株则能在白细胞内生长繁殖。 3、肠毒素 金黄色葡萄球菌的某些菌株能产生引起急性肠胃炎的肠毒素。 肠毒素共分6型(A、B、C1．C 2、D、E)，各型具有不同的血清学特性，其中以A型引起的食物中毒最多，B型和C型次之。 该毒素为一种可溶性蛋白质，耐热，经l00℃煮沸30min不被破坏，也不受胰蛋白酶的影响。可使人、猫、猴引起急性胃肠炎症状。 4、血浆凝固酶 这是一种能使含有枸橼酸钠或肝素抗凝剂的兔或人血浆发生凝固的酶。 大多数致病性葡萄球菌产生此酶，而非致病性菌一