千佛菌对t1dm模型小鼠th1th2类细胞因子基因表达双向调节作用-bidirectional regulation of thousand buddha bacteria on th1th2 cytokine gene expression in t1dm mice.docxVIP

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千佛菌对t1dm模型小鼠th1th2类细胞因子基因表达双向调节作用-bidirectional regulation of thousand buddha bacteria on th1th2 cytokine gene expression in t1dm mice

陕西中医学院学位论文独创性声明及使用授权声明学位论文独创性声明本人郑重声明: 所呈交的学位论文,是个人在导师的指导下,独立进行研究工 作所取得的成果,无抄袭及编造行为。除文中已经特别加以注明引用的内容外,本论 文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡 献的个人和集体,均已在文中以明确方式标明并致谢。本人完全意识到本声明的法律 结果并由本人所承担的法律责任。学位论文作者签名_____ 日 期:年月日关于学位论文使用授权的声明 陕西中医学院有权保留使用本人学位论文,同意学院按规定向国家有关部门机构送交论文的复印件和电子版,允许被查阅和借阅。本人授权陕西中医学院可以将本学 位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或其他复印 手段保存和汇编本学位论文。可以公布(包括刊登)论文的全部或部分内容。 (保密论文在解密后应遵守此规定) 论文作者签名_____日 期:年月日论文导师签名_____日 期:年月日 引 言 生命在于平衡,健康在于平衡。现代生命科学的主题是机体的稳态和适应是如何实 现的。研究证实,Th1/Th2 漂移(失衡)会导致多种免疫性疾病的发生。要纠正免疫失 衡,治疗由此引起的疾病,必须抑制过高(亢进)的免疫反应,增强低下的免疫功能, 使机体恢复并维持免疫平衡和稳定。在体内,Thl 细胞主要分泌 IL-2、IFN-γ和 TNF- α等细胞因子,Th2 细胞则主要分泌 IL-4 和 IL-10 等细胞因子。Th1/Th2 细胞之间互为 调节细胞,通过其分泌的不同细胞因子间的相互制约,处于动态平衡状态,维持机体免 疫系统的正常功能。近年来大量的研究已经证明,Th1/Th2 类细胞因子不同的优势应 答模式与很多疾病的发病和转归有关,而 Th1/Th2 的漂移就是细胞因子不平衡表达的 状态。细胞因子表达及分布的异常和细胞因子网络的失衡与疾病的发生、发展及预后 密切相关。1 型糖尿病是一种 T 细胞介导的器官特异性自身免疫性疾病,在其发病中有+许多免疫细胞参与,其中 CD4T 淋巴细胞起中心性作用并与 Th1/Th2 的失衡密切相关。免疫调节作用是中药的重要特色和临床优势,中药可通过免疫调节治疗多种免疫性疾病。这一点是西药所无法替代的,西药虽然作用靶点明确,治疗效果明显,但往往是 单向调节,而且因其毒副作用(如免疫制剂)、耐药性等原因,局限性强,因此人们更 加迫切的需要毒副作用小、具有双向作用的免疫调节剂。由于 Th1/Th2 类细胞因子的 漂移是许多免疫性疾病发生、发展的分子基础,因此纠正 Th1/Th2 的漂移,维持免疫 系统的动态稳定是治疗这类疾病的新思路,而目前国内外对中医药通过恢复 Th1/Th2 平衡治疗免疫性疾病的实验研究和临床研究较少。近年来,席孝贤、贺新怀教授从细 胞因子水平对药食两用真菌类中药—千佛菌的免疫调节作用进行了研究,前期研究已 初步证明千佛菌是一种具有双向调节作用的生物调节剂,对 Th1/Th2 失衡有明显的调 节作用,可以纠正 Th1/Th2 的漂移,通过免疫调节作用治疗发病机理相反的免疫性疾 病。 随着生命科学研究的深入和医学技术的发展,人们对生命现象和本质有了更深 层次的认识,已经从器官、组织、细胞水平深入到分子、基因水平,分子生物学的理 论和技术已渗透到医药卫生的各个领域。而对于基因表达与调控的研究是目前分子生 物学最重要最活跃的领域之一。研究基因的表达调控,将进一步阐明生命观,解释细 胞行为和疾病发生的机制,从而在分子水平上为人类疾病的诊断、治疗和预防提供理论依据和实用技术。mRNA 是连接基因与表达产物的桥梁,基因活化的直接结果是 mRNA转录增加。研究表明,许多生物活性分子的产生是在 mRNA 转录水平上调节的。本课 题在前期研究的基础上,结合 Th1/Th2 细胞亚群失衡(漂移)在免疫性疾病中的作用, 应用荧光定量 PCR 技术,观察千佛菌对 1 型糖尿病模型小鼠 IL-2mRNA 和 IL-10mRNA 的影响,从基因表达水平阐明中药千佛菌的双向调节作用,进一步阐释千佛菌通过免 疫调节防治免疫性疾病的作用和机理,为开发新的中药免疫调节剂提供理论依据。 实验部分 一、实验目的 通过研究千佛菌对 1 型糖尿病模型小鼠细胞因子 IL-2mRNA、IL-10mRNA 水平及血糖的影响,从基因表达水平阐明千佛菌的双向调节作用;进一步探讨千佛菌对 I 型糖 尿病小鼠的防治作用及免疫学机理。 二、实验材料 (一)实验动物 清洁级健康昆明种小鼠 46 只,雌雄各半,体重(18-20g),购自西安交通大学医学 实验动物中心,许可证号:SCXK(陕)2007-001。实验前在实验室内适应性喂养观察一周, 分笼饲养,自由进食进水,

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