胞质雄性不育大白菜与羽衣甘蓝种间杂交的分析-analysis of interspecific hybridization between cytoplasmic male sterile chinese cabbage and kale.docx

院阿]农业^学博士学位诧空中文摘要本文研究_『细胞质雄性不育夫白菜与羽衣甘蓝的种间杂交，cMs撼因首 次成功地转育到了羽衣甘蓝上，获得了cMS种间杂种。采用了多种方法克服 种问杂交障碍，对种问杂交亲和性、种问杂种胚舶发育、予房与胚珠离体挽 救培养、形态学’j细胞学、同工酶进行了系统研究，获得了如下结果：J．大白菜与羽农甘蓝种间隔离严重，常规花期杂交不结实。介八桥梁种 甘蓝型油菜可使结实率极显著提高，蕾期授掰和多次蕈复授粉可有效克服种 间杂交不亲和障碍，而授粉后补充不同浓度的外源激素卧和NAA对克服种 间杂交不亲和障碍无显著效果。种问杂交授粉后花粉管牛长基本正常，柱头 抑制仅在一定程度上存在。2．大白菜与制农甘蓝种间杂种胚胎发育障碍普遍存在，种问杂台胚败育 开始于球形胚阶段，表现在胚乳细胞化并过度增生。幼龄子房及胚珠离体挽 救培养可使杂合胚继续发育至成熟。于房离体培养的最佳日龄为授粉后7-9 天，细胞分裂素与生长素之比为20：1、蔗糖浓度为40—509·L时有利于提 高杂交予房离体培养的结籽率和发芽率。胚珠离体挽救的虽佳日龄为9 14 灭，此时胚珠外表黄润、微凹陷。液体振荡培养与琼脂培养相比，可显著促 进杂种胚珠的离体成苗，而花器附属物及营养添加物效果不明显。3．从形态学、春化习性、根尖细胞染色体数日三个方面，对种问杂种真 实性进行了鉴定。种问杂种苗期和莲座期株型、叶型、叶色、瓣型等眭状同 时具奇双亲的特征，而花药形状、饱满程度、蜜腺大小和数目则表现为母本 类型。种问杂种春化习性居于双亲之间。大白菜与桥梁种甘蓝型油菜、大白 菜与羽衣甘蓝的种间杂种根尖细胞染色体数目均为双亲配子染色体数日之 和，为预期真杂种。(大白菜×甘蓝型油菜)×羽表甘蓝种问杂种F。单株根 尖细胞染色体数日极其复杂，细胞内存在双亲的2n体细胞类型、n配子类型、 双亲的n配子所组成的新类型、自然加倍类型等，染色体数目尚不稳定。4．种间杂种不育度和不育株率均为10帆。Ogura种问杂种于孢原细胞分中文摘垂化期表现出花药发育障碍；少数发育正常的花药中，减数分裂四分体时期中 层细胞不解体，绒粘层细胞液泡化异常膨大，不解体，小孢子发育至单核期 败育。Ar种间杂种主要在小孢子单核至双核期表现出明显败育症状。5．种问杂种花粉母细胞染色体存在多种联会配对构型，芸薹属A与C染 色体组间具有较高的同源性。吾染色体问同时存在不配对现象和倒置结构， 减数分裂后期l出现滞后染色体和染色体桥。6．种问杂种过氧化物酶谱带可以归纳为三种类型：双亲加强型、丢失双 亲带型和双亲互补型。种间杂种酯酶问【酶谱带可以归纳为两种类型：双亲 互补型和丢失双亲带型。关键词：胞质雄性不育基因；大白菜；羽衣甘蓝；种问杂交11沈阳农业大学博士学位论文前言埘农甘蓝(Br,8ssic,e o]12f。tc5,o vat．adophala DC．)足十字花科芸薹属 自蓝的变种，不结球。麒产地中海投小亚细亚一带，栽培历史悠久。日前我国大中城市引种栽培较多，观赏兼菜用。荆农甘蓝耐寒性强，15℃低温下，中心叶片由绿色转为红、粉、黄，白色等各色，绚丽如花，观赏价值高．是 我国北方秋冬及早春园林绿化的重要景观植物。羽衣甘蓝叶片中含有丰富的 营养物质，在甘蓝类蔬菜中不亚于青花菜，色泽鲜艳，是新型珍稀特菜。此 外，羽衣甘蓝对十字花科根肿病免疫性高，其遗传物质与十字花科其他蔬菜 遗传物质的结合，将对十宁花科物种进化和蔬菜、花卉新品种选育产生较大 影响。由于园林绿地的普遍应用，近年来我嗣从国外引进了若干羽衣甘蓝F． 杂种，自繁后代性状分离严重，植株整齐度下降，故需年年高价从崮外购种。 由于国外商品生产资料保密，要想结束国外育种公司垄断我国羽衣甘蓝杂交 种市场的局面，必须从基础工作抓起，以现有国外品种作为亲本材料，自：E 选育羽衣甘蓝杂交种，为最终刨造经济和社会效益奠定基础。国外高杆利衣甘蓝以饲用为主，栽培研究多以产量、产后生理为主。观 赏羽衣甘蓝品种虽在商业领域应用较多，但杀见品种选育相关外文文献报 道。国内近年对于羽衣甘龉的引种栽培已有一些文献报道(饶璐璐，1997： 张安文等．1999；曹华，2001：方淑桂等，2002)。上海市动植物引种研究 中心的郑洪建、顾卫红(郑洪建等，2001；顾卫红等，2002，2003)研究了 自交留种技术，初步探索了主要遗传性状的传递规律。解莉楠(2003)对羽 衣甘蓝的自交不亲和性、叶型、叶色性状遗传进行了初步研究。为了扩大繁 殖优良F．数量，研究者进行了羽衣甘蓝的离体繁殖研究(王怀名等，i995： 刘建等2001；’j 2淑香等，2002；祝朋芳等，2003)。关于羽衣甘蓝椎性不育 的研究，尚未见报道。十字花科芸薹属作物异花传粉，杂种优势明显。优势育种是目前育种工Ili『=作的主流，但某种作物的