乳酸穿梭在心肌缺血再灌注损伤中保护作用分析-protective effect of lactate shuttle on myocardial ischemia-reperfusion injury.docxVIP

目录 英文缩略词表 1 中文摘要 2 Abstract 7 前言 15 第一部分 心肌细胞缺血再灌注期间乳酸穿梭相关蛋白表达变化 19 1 材料与方法 20 2 结果 27 3 讨论 35 4 参考文献 37 第二部分 乳酸穿梭在心肌细胞缺血再灌注期间作用研究 39 1 材料与方法 39 2 结果 46 3 讨论 52 4 参考文献 53 第三部分 曲美他嗪对心肌细胞缺血再灌注乳酸穿梭作用的影响 55 1 材料与方法 55 2 结果 63 3 讨论 71 4 参考文献 72 结论 74 综述 75 附录 84 致 谢 85 华中科技大学博士学位论文 华 中 科 技 大 学 博 士 学 位 论 文 PAGE 10 PAGE 10 英文缩略词表 英文缩写 英文全称 中文名称 ATP Adenosine-5’-triphosphoric acid 三磷酸腺苷 Bp Base pair 碱基对 cDNA DMEM DMSO Complementary DNA Dulbecco’s modified eagle’s medium Dimethyl sulphoxide 互补 DNA DMEM 培养液 二甲基亚砜 EDTA Ethylene diamine tetraacetic acid 乙二胺四乙酸 FITC fluorescein isothiocyanate 异硫氰酸荧光素 FFA free fatty acid 游离脂肪酸 GAPDH HRP IRI glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase horseradish peroxidase ischemia-reperfusion injury 甘油醛-3-磷酸脱氢酶 辣根过氧化物酶 缺血再灌注损伤 LDH lactate dehydrogenase 乳酸脱氢酶 MCT monocarboxylate transporter 单羧酸转运蛋白 mRNA NADH Messenger ribonucleic acid Reduced nicotinamide adenine 信使 RNA 还原型烟酰胺腺嘌呤二 dinucleotide 核苷酸 OD optic density 光密度 PBS Phosphate balanced solution 磷酸盐缓冲液 PDH pyruvate dehydrogenase 丙酮酸脱氢酶 RT-PCR Reverse transcription PCR 逆转录聚合酶链反应 SDS－PAGE Polyacrylamide gel electrophoresis Sodium dodecyl sulfate SDS－聚丙烯酰胺凝胶 电泳 TMZ trimetazidine 曲美他嗪 乳酸穿梭在心肌缺血再灌注损伤中保护作用研究 博士研究生: 戴中亮 博士生导师: 姚尚龙 教授 华中科技大学同济医学院附属协和医院麻醉科 武汉 430022 中文摘要 研究证明乳酸是机体的重要能量物质之一，在机体内广泛存在乳酸穿梭现象。心 肌是具有高度氧化特性的肌肉，心脏能够主动利用乳酸作为能源物质。同时研究发现， 当血液中的乳酸通过血液循环经过心脏组织，随着心肌摄氧量的增加，心脏优先选择 的能量供应物质是乳酸，这主要是由于心肌中有大约 60％的底物能够利用乳酸，心脏 细胞间乳酸穿梭有待进一步研究。 缺血再灌注损伤(Ischemia reperfusion injury，IRI）好发于对氧需求较高的 组织器官如心、脑等。迄今为止缺血再灌注的机制并未完全阐明，目前普遍认为能量 代谢变化参与了心肌细胞缺血以及缺血后再灌注受损，因血流的变化而产生氧供及代 谢失衡，进而能量供应不足，加之中间环节受阻，代谢产物如乳酸等堆积，导致心肌 缺血再灌注损伤。心肌缺血损伤本质上是因为缺氧导致的能量供应不足，导致离子通 道障碍和氧自由基等大量产生，由此我们推测：在心肌缺血再灌注损伤中是否存在乳 酸穿梭现象，即缺血期间转出乳酸以利于糖酵解持续进行，而再灌注期间转入乳酸利 于氧化；这种乳酸穿梭是否对心肌具有保护作用。 本研究分三部分，分别依次从分子水平研究心脏在缺血再灌注乳酸穿梭相关蛋白 MCT1，MCT4 表达变化；其次用干扰 RNA 技术沉默 MCT 表达后研究心肌细胞缺血再灌注 时细胞活力和凋亡的变化；最后研究在缺血再灌注期间临床能量代谢药物曲美他嗪对 心肌细胞乳酸穿梭系统的影响，为将来乳酸穿梭在临床的应用做好前期基础研究。 第一部分 心肌细胞缺血再灌注期间乳酸穿梭相关蛋白表达变化 【目的】研究心肌缺血再灌注损伤时乳酸穿梭相关蛋白和乳酸浓度的变化，以探讨心 肌细胞在缺血情况下是否存在乳酸转出，