下调mir-155的表达对人a549ddp细胞株顺铂耐药性的影响及机制-effect and mechanism of down-regulating mir - 155 expression on cisplatin resistance of human a 549 ddp cell line.docxVIP
- 31
- 0
- 约7.07万字
- 约 64页
- 2018-08-07 发布于上海
- 举报
下调mir-155的表达对人a549ddp细胞株顺铂耐药性的影响及机制-effect and mechanism of down-regulating mir - 155 expression on cisplatin resistance of human a 549 ddp cell line
万方数据
原创性声明
本人郑重声明:所呈交的学位论文,是本人在导师的指导下,独立进行研 究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外,本论文不包含任何其他个人 或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集 体,均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。
学位论文作者: 日期: 年 月 日
学位论文使用授权声明
本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品,知识产权归属郑州大学。 根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定,同意学校保留或向国家有关部 门或机构送交论文的复印件和电子版,允许论文被查阅和借阅;本人授权郑州 大学可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索,可以采用影印、 缩印或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学 位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时,第一署名单位仍然为郑 州大学。保密论文在解密后应遵守此规定。
学位论文作者: 日期: 年 月 日
摘 要
下调 miR-155 的表达对人 A549/DDP 细胞株顺铂耐药性 的影响及机制
硕士研究生:黄凤祥 导 师:苗丽君
郑州大学第一附属医院呼吸与危重症科 河南 郑州 450052
摘 要
背景与目的:
肺癌已成为全球范围内发病率与病死率均居首位的恶性肿瘤。化疗是进展 期非小细胞肺癌重要的治疗手段,但是临床上常常由于癌细胞对药物耐药导致 化疗失败。近来研究表明非蛋白编码小分子 RNA(miRNA)能通过基因突变、调 节肿瘤相关靶基因及增殖凋亡相关基因影响肺癌的发生发展及药物的敏感性。 miR-155 作为 miRNA 家族中的一种,大量研究也证实其参与了多种恶性肿瘤的 发生发展与耐药,但 miR-155 在肺癌中所担当的角色及影响肺癌的相关机制仍存 在争议。本研究通过观察 miR-155 在 A549 及其耐药细胞株 A549/DDP 中的 表达差异,探究其对肺癌细胞及顺铂敏感性的影响及机制,为耐药型肺腺癌的 个体化治疗提供新的思路。
方法:
1.细胞培养:人肺腺癌 A549、A549/DDP 细胞株在RPMI-1640完全培养基
(含10%胎牛血清及1%青链霉素混合液)中生长,并放???具有适宜条件的细胞 培养箱中(37℃,5%CO2,饱和湿度)。( A549/DDP细胞培养基中加入终浓度 为1μg /ml的顺铂以维持其耐药性。)
2.耐药株的鉴定及miR-155及 TP53INP1mRNA表达差异的检测:MTT 法检 测A549/DDP 及A549两个细胞株对顺铂的IC50,计算耐药倍数;分别提取两种
I
细胞的总 RNA,并进行质检, 采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测A549/DDP
细胞株及A549细胞株中miR-155 及 TP53INP1mRNA的表达差异,实验数据采用 2-△△Ct进行分析。
3.A549/DDP细胞转染:将实验分为抑制剂组(miR155-inhibitor转染组), 空转染组 (NC-inhibitor转染组)和未转染组。将FAM 标记的miR155 抑制物
(FAM -miR155-inhibitor )或FAM 标记的阴性对照链(FAM-NC-inhibitor)和 Lipofectamine?2000 混合后转染A549/DDP细胞株。
4.指标检测:qRT-PCR检测A549/DDP细胞转染抑制剂前后的miR-155 表达 情况; qRT-PCR 和Western-blot 技术检测A549/DDP 细胞转染前后预测靶基因 TP53INP1及其蛋白的表达情况;Western-blot 技术检测A549/DDP 细胞转染前 后Bax 和Bcl-2蛋白的表达变化; MTT 实验及流式细胞术检测miR155- inhibitor 转染后A549/DDP 对顺铂敏感性、增殖能力及凋亡的变化。
5.统计学分析:采用 SPSS 19.0 统计软件分析。定量资料用均数±标准差
( x ±S)表示,多组间比较用单因素方差分析,应用 logistic 回归模型计算半 数抑制浓度(50% Inhibitory Concentration,IC50)值,以 α =0.05 作为检验水准。
结果:
1.顺铂对 A549 和 A549/DDP 细胞的 IC50 分别为 16.20±2.27 μmol/L、69.72
±4.83 μmol/L, A549/DDP 的 IC50 值是 A549 的 4.3 倍,差异具有统计学意义(t = 17.36, P = 0.001)。
2.qRT-PCR 结果结果显示 miR155 在 A549/DDP 细胞中高表达,约是 A549 细 胞的 8.93 倍,TP53INP1 mRNA 则在其中低表达, 差异均具
您可能关注的文档
- 卫星光通信信道编码技术分析-analysis of satellite optical communication channel coding technology.docx
- 外部可调限流型恒流恒压dc-dc转换器的研究-research on external adjustable current limiting constant current and constant voltage dc - dc converter.docx
- 五甲基槲皮素pmq对3t3-l1脂肪细胞脂联素表达的影响及相关机制研究-effects of pentamethyl quercetin pmq on adiponectin expression in 3t3 - l1 adipocytes and related mechanisms.docx
- 卫星导航系统抗干扰自适应调零算法分析-analysis of anti-interference adaptive zeroing algorithm for satellite navigation system.docx
- 乌司他丁对大鼠急性肺损伤肺组织nfκb表达的影响及其肺保护作用-effect of ulinastatin on nf κ b expression in lung tissue of rats with acute lung injury and its protective effect on lung.docx
- 乌梁素海冰封期重金属元素分布规律及其室内模拟试验分析-distribution law of heavy metal elements in wuliangsuhai frozen period and analysis of its indoor simulation test.docx
- 哮喘大鼠差异表达基因筛选及柴朴汤的干预分析-screening of differentially expressed genes in asthmatic rats and intervention analysis of chaipu decoction.docx
- 伪码测距系统中多普勒频移的影响及其解决方法分析-analysis of the influence of doppler frequency shift and its solution in pseudo-code ranging system.docx
- 乌饭树果实花色苷的提取及其抗氧化和抑菌特性分析-extraction of anthocyanin from vaccinium bracteatum fruit and analysis of its antioxidant and antibacterial properties.docx
- 围产期环境因素和全基因组关联分析提示的snps与婴儿乙肝疫苗免疫应答关联分析-correlation analysis between perinatal environmental factors and snps suggested by genome-wide association study and immune response of infants to hepatitis b vaccine.docx
- 协同演化视角下地方产业集群形成机制研究——以禹州钧瓷文化产业集群为例-research on the formation mechanism of local industrial clusters from the perspective of coordinated evolution - a case study of jun porcelain cultural industrial clusters in yuzhou.docx
- 五苓散对高盐诱发羔羊尿结石防治作用的分析-analysis of the preventive and therapeutic effects of wuling powder on high salt-induced urinary calculus in lambs.docx
- 万能轧机液压agc系统建模及控制方法分析-modeling and control method analysis of hydraulic agc system for universal rolling mill.docx
- 五芳斋可持续发展战略分析-analysis on the sustainable development strategy of wufangzhai.docx
- 五位一体:老年人长期照护服务供给体系研究—— 以s市j区“乐龄生活圈”为例-five - in - one research on the supply system of long-term care services for the elderly - taking.docx
- 乌头碱阻断表达在非洲爪蟾卵母细胞上人类kv1.5和herg钾通道-aconitine blocks human kv 1.5 and herg potassium channels expressed on xenopus laevis oocyte.docx
- 乌珠穆沁羊生长过程中肌内结缔组织中ⅰ、ⅲ型胶原蛋白变化-changes of collagen type ⅰ and ⅲ in intramuscular connective tissue during the growth of wuzhumuqin sheep.docx
- 人民币汇率变动对山东省fdi流入的影响研究——基于总量规模和分来源国面板数据的实证分析-research on the impact of rmb exchange rate changes on fdi inflows in shandong province - based on the empirical analysis of total scale and panel data of different countries of .docx
- 圩猪和皖南黑猪h-fabp基因多态性及其对经济性状的遗传效应分析-analysis of h - fabp gene polymorphism and its genetic effect on economic traits in polder and southern anhui black pigs.docx
- 围场脱贫发展战略分析-analysis on the development strategy of poverty alleviation in paddock.docx
最近下载
- (已压缩)TUCST007-2020房屋建筑与市政基础设施工程施工安全风险评估技术标准.docx VIP
- 2026年国家公务员考试申论真题及参考答案(考生回忆版).docx VIP
- 部编版语文二年级上册期中常考七大重点题型专项训练.docx VIP
- 机器人操作系统(ROS)及仿真应用 课件全套 第1--9章 Linux Ubuntu入门基础--- 基于ROS的服务机器人应用实例.ppt
- 压疮的预防及护理技术操作考核评分标准编辑.docx VIP
- 高温超导材料在量子计算中的应用前景.docx VIP
- 铺床术操作评分标准.doc VIP
- 2025年陕西高中学业水平合格性考试历史试卷真题(含答案) .pdf VIP
- RAZ-P英语绘本FRIENDS AROUND THE WORLD(带练习册).pdf VIP
- 安全文明施工标准做法(2026版).docx VIP
原创力文档

文档评论(0)