下调mir-155的表达对人a549ddp细胞株顺铂耐药性的影响及机制-effect and mechanism of down-regulating mir - 155 expression on cisplatin resistance of human a 549 ddp cell line.docxVIP

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  • 2018-08-07 发布于上海
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下调mir-155的表达对人a549ddp细胞株顺铂耐药性的影响及机制-effect and mechanism of down-regulating mir - 155 expression on cisplatin resistance of human a 549 ddp cell line.docx

下调mir-155的表达对人a549ddp细胞株顺铂耐药性的影响及机制-effect and mechanism of down-regulating mir - 155 expression on cisplatin resistance of human a 549 ddp cell line

万方数据 原创性声明 本人郑重声明:所呈交的学位论文,是本人在导师的指导下,独立进行研 究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外,本论文不包含任何其他个人 或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集 体,均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。 学位论文作者: 日期: 年 月 日 学位论文使用授权声明 本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品,知识产权归属郑州大学。 根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定,同意学校保留或向国家有关部 门或机构送交论文的复印件和电子版,允许论文被查阅和借阅;本人授权郑州 大学可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索,可以采用影印、 缩印或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学 位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时,第一署名单位仍然为郑 州大学。保密论文在解密后应遵守此规定。 学位论文作者: 日期: 年 月 日 摘 要 下调 miR-155 的表达对人 A549/DDP 细胞株顺铂耐药性 的影响及机制 硕士研究生:黄凤祥 导 师:苗丽君 郑州大学第一附属医院呼吸与危重症科 河南 郑州 450052 摘 要 背景与目的: 肺癌已成为全球范围内发病率与病死率均居首位的恶性肿瘤。化疗是进展 期非小细胞肺癌重要的治疗手段,但是临床上常常由于癌细胞对药物耐药导致 化疗失败。近来研究表明非蛋白编码小分子 RNA(miRNA)能通过基因突变、调 节肿瘤相关靶基因及增殖凋亡相关基因影响肺癌的发生发展及药物的敏感性。 miR-155 作为 miRNA 家族中的一种,大量研究也证实其参与了多种恶性肿瘤的 发生发展与耐药,但 miR-155 在肺癌中所担当的角色及影响肺癌的相关机制仍存 在争议。本研究通过观察 miR-155 在 A549 及其耐药细胞株 A549/DDP 中的 表达差异,探究其对肺癌细胞及顺铂敏感性的影响及机制,为耐药型肺腺癌的 个体化治疗提供新的思路。 方法: 1.细胞培养:人肺腺癌 A549、A549/DDP 细胞株在RPMI-1640完全培养基 (含10%胎牛血清及1%青链霉素混合液)中生长,并放???具有适宜条件的细胞 培养箱中(37℃,5%CO2,饱和湿度)。( A549/DDP细胞培养基中加入终浓度 为1μg /ml的顺铂以维持其耐药性。) 2.耐药株的鉴定及miR-155及 TP53INP1mRNA表达差异的检测:MTT 法检 测A549/DDP 及A549两个细胞株对顺铂的IC50,计算耐药倍数;分别提取两种 I 细胞的总 RNA,并进行质检, 采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测A549/DDP 细胞株及A549细胞株中miR-155 及 TP53INP1mRNA的表达差异,实验数据采用 2-△△Ct进行分析。 3.A549/DDP细胞转染:将实验分为抑制剂组(miR155-inhibitor转染组), 空转染组 (NC-inhibitor转染组)和未转染组。将FAM 标记的miR155 抑制物 (FAM -miR155-inhibitor )或FAM 标记的阴性对照链(FAM-NC-inhibitor)和 Lipofectamine?2000 混合后转染A549/DDP细胞株。 4.指标检测:qRT-PCR检测A549/DDP细胞转染抑制剂前后的miR-155 表达 情况; qRT-PCR 和Western-blot 技术检测A549/DDP 细胞转染前后预测靶基因 TP53INP1及其蛋白的表达情况;Western-blot 技术检测A549/DDP 细胞转染前 后Bax 和Bcl-2蛋白的表达变化; MTT 实验及流式细胞术检测miR155- inhibitor 转染后A549/DDP 对顺铂敏感性、增殖能力及凋亡的变化。 5.统计学分析:采用 SPSS 19.0 统计软件分析。定量资料用均数±标准差 ( x ±S)表示,多组间比较用单因素方差分析,应用 logistic 回归模型计算半 数抑制浓度(50% Inhibitory Concentration,IC50)值,以 α =0.05 作为检验水准。 结果: 1.顺铂对 A549 和 A549/DDP 细胞的 IC50 分别为 16.20±2.27 μmol/L、69.72 ±4.83 μmol/L, A549/DDP 的 IC50 值是 A549 的 4.3 倍,差异具有统计学意义(t = 17.36, P = 0.001)。 2.qRT-PCR 结果结果显示 miR155 在 A549/DDP 细胞中高表达,约是 A549 细 胞的 8.93 倍,TP53INP1 mRNA 则在其中低表达, 差异均具

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