EGFRKLF4在不同临床分期肺癌组织中表达变化研究.docVIP

EGFRKLF4在不同临床分期肺癌组织中表达变化研究 　　【摘要】 目的：探讨表皮生长因子受体（EGFR）、Kruppel样因子（KLF4）在不同临床分期肺癌组织中的表达变化。方法：选取本院肿瘤内科肺癌患者63例，手术收集肺癌组织标本63例作为研究组，癌旁正常肺组织（肺癌边缘外5 cm）标本60例作为对照组，采用免疫组化方法检测EGFR、KLF4表达，比较组间及不同临床分期EGFR、KLF4阳性率的差异。结果：研究组EGFR阳性率明显高于对照组，KLF4阳性率明显低于对照组，差异均有统计学意义（P0.05）。Ⅲ～Ⅳ期EGFR阳性率明显高于Ⅰ～Ⅱ期肺癌组织，Ⅲ～Ⅳ期KLF4阳性率明显低于Ⅰ～Ⅱ期，差异均有统计学意义（P0.05）。结论：EGFR在肺癌组织中阳性表达率显著增高，而KLF4在肺癌组织中的阳性表达率显著降低，其中肺癌组织临床分期越高，EGFR阳性率越高，KLF4阳性率越低。 　　【关键词】 表皮生长因子受体； Kruppel样因子； 临床分期； 肺癌 　　目前，随着经济社会的发展，环境污染加重和吸烟等多种影响因素均导致肺癌发生率和死亡率逐渐增加[1]。目前关于肺癌的病理发生机制尚未完全明确，其中与肺癌紧密相关性基因有P53、FHJT和Bal-2基因等，上述基因表达异常是导致肺癌发生和发展的重要因素[2-3]。但关于EGFR、KLF4在不同临床分期肺癌组织中的表达变化研究甚少，现报道如下。 　　1 资料与方法 　　1.1 一般资料 选取2013年1月-2015年1月本院收治的肿瘤内科肺癌患者63例作为研究对象，手术期间收集肺癌组织标本63例作为研究组，癌旁正常肺组织（肺癌边缘外5 cm）标本60例作为对照组。纳入标准：全部患者均符合肺癌的手术病理学诊断标准，术前未接受辅助治疗[4]。排除标准：严重未控制性急性感染或内科疾病史，未同意此次临床试验研究，合并其他肿瘤，急性肺脓肿和急性肺结核患者。其中男40例，女23例，年龄45～63岁，平均（53.64±8.59）岁，临床TNM分期：Ⅰ期11例，Ⅱ期14例，Ⅲ期29例，Ⅳ期9例；病理类型：鳞癌25例，腺癌30例，小细胞肺癌8例；组织分化程度：高分化13例，中分化34例，低分化或未分化16例；合并淋巴结转移35例，无淋巴结转移28例；手术方式：肺叶切除术40例，全肺切除术23例。 　　1.2 检测方法 （1）试剂与仪器：兔抗人EGFR、KLF4单克隆抗体，PBS缓冲液（美国Sigma公司），DAB显色试剂盒（北京中杉金桥生物技术公司）。（2）操作步骤：采用免疫组化方法，10%甲醛固定，脱水、石蜡包埋，连续4 μm切片，脱蜡、水化和自来水冲洗，采用柠檬酸抗原修复液高温高压抗原修复，室温下冷却10 min，采用自来水在压力锅外壁冲淋修复液冷却，冷却至室温后取出切片，自来水冲洗，PBS冲洗3 min×2次，室温下孵育10 min，PBS冲洗3 min×3次，滴加100 μL一抗，EGFR（1∶150）、KLF4（1∶100），4 ℃冰箱孵育过夜，PBS冲洗3 min×3次，滴加二抗，室温下孵育15 min，PBS冲洗3 min×3次，滴加DAB显色剂，显色3 min，自来水冲洗终止显色，苏木精复染，PBS返蓝，梯度乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。 　　1.3 免疫组化结果判定 EGFR、KLF4以细胞膜和细胞浆出现棕黄色颗粒为阳性染色[5-6]，400倍视野下随机选取5个视野，当阳性细胞比例≤5%评定为0分，6%～25%评定为1分，26%～50%评定为2分，51%～75%评定为3分，≥75%评定为4分；当显色强度为未着色者评定为0分，显色强度为浅黄色者评定为1分，棕黄色者评定为2分，棕褐色者评定为3分，阳性细胞比例×显色强度划分等级，其中0～1分为阴性，2～4分为弱阳性，5～7分为阳性，≥8分为强阳性。 　　1.4 统计学处理 本研究数据采用SPSS 18.0统计学软件进行分析，计量资料以（x±s）表示，比较采用t检验，计数资料以百分比表示，比较采用 字2检验，以P0.05表示差异有统计学意义。 　　2 结果 　　2.1 两组EGFR、KLF4阳性率的比较 研究组EGFR阳性率明显高于对照组，KLF4阳性率明显低于对照组，两组比较差异均有统计学意义（P0.05），见表1。 　　2.2 不同临床分期肺癌组织EGFR、KLF4阳性率的比较 Ⅲ～Ⅳ期EGFR阳性率明显高于Ⅰ～Ⅱ期，Ⅲ～Ⅳ期KLF4阳性率明显低于Ⅰ～Ⅱ期，两者比较差异均有统计学意义（P0.05），见表2。 　　3 讨论 　　EGFR是ERB-B家族成员之一，是一种170ku的膜受体蛋白，具有酪氨酸激酶活性，与生长因子结合具有活化细胞内信号传导，促进细胞增殖，而表皮生长因子受体自身则发生内化作用