TGFβ1与Smad23在乳腺癌组织中表达及意义.docVIP

TGFβ1与Smad23在乳腺癌组织中表达及意义 　　[摘要] 目的 研究TGFβ1与Smad2/3在乳腺癌组织中的表达，揭示其在乳腺癌中的信号转导通路。 方法 应用免疫组化SABC法检测62例乳腺癌组织中TGFβ1与Smad2/3的表达情况，利用SPSS19.0统计学软件分析TGFβ1与Smad2/3的差异性及相关性。 结果 TGFβ1与Smad2/3在乳腺癌组织中呈高表达，阳性表达率依次为69.35%（43/62）和40.32%（25/62）。TGFβ1与Smad2/3在乳腺癌组织中的表达与年龄无关，TGFβ1与Smad2/3在组织学分级、病理学分类、TNM分期方面差异均有统计学意义（P0.05）。TGFβ1与Smad2/3在乳腺癌组织中的表达呈正相关（r=0.261，P0.05）。 结论 乳腺癌的发生可能与TGFβ1及Smad2/3信号转导途径发生异常，致使下游信号Smad2/3突变，增加瘤细胞与细胞外基质的相互作用、抑制免疫系统、增加血管形成等机制促进乳腺癌的浸润和转移有关。 　　[关键词] 乳腺癌；TGFβ1；Smad2/3；相关性 　　[中图分类号] R737.9 [文献标识码] A [文章编号] 1673-9701（2015）17-0011-03 　　转化生长因子β（transforming growth factor beta，TGFβ）是一族能引起细胞产生表型变化、具有多种生物学功能的蛋白多肽，可调节多种正常细胞或瘤细胞的生长分化。目前研究[1，2]表明：TGFβ/Smads信号途径不仅在细胞及生物体生长和发育过程中起重要作用，而且与人体肿瘤的发生、发展有密切关联。TGFβ/Smads信号转导途径中一旦发生异常就可引起信号转导紊乱，从而导致肿瘤的发生[3]。所以探讨TGFβ1与Smad2/3在乳腺癌组织中的表达，有利于揭示其在乳腺癌中的信号转导通路。 　　1 资料与方法 　　1.1 一般资料 　　选取阜新市中心医院2004～2014年间62例乳腺癌存档标本。患者年龄27～78岁，平均49岁。组织学分级按照Elston等[4]提出的Bloom-Richardson分级（即Nottingham分级），对每例乳腺癌组织从腺管形成、核分裂数和癌细胞异型性3个方面进行评分，按所得总分进行分级：3～5 分为Ⅰ级，6～7 分为Ⅱ级，8～9分为Ⅲ级，Ⅰ级14例，Ⅱ级25例，Ⅲ级23例。病理学分类方法参照WHO1981年制定的乳腺癌分类[5]：导管内癌8例、浸润性导管癌48例、浸润性小叶癌4例、浸润性特殊癌2例。根据国际抗癌联盟（UICC）关于TNM分期方法[6]进行临床分期：Ⅰ期8例，Ⅱ期14例，Ⅲ期32例，Ⅳ期8例。 　　1.2 试剂及方法 　　1.2.1 主要试剂 鼠抗人TGFβ1多克隆抗体，鼠抗人Smad2/3多克隆抗体（美国，Santa Cruz），SABC免疫组化染色试剂盒，DAB显色盒（武汉博士德生物工程有限公司）。 　　1.2.2 方法 应用免疫组织化学染色SABC法观察TGFβ1与Smad2/3在乳腺癌中的表达分布情况。切片常规脱蜡至水，浸入枸橼酸盐缓冲液，然后微波加热15 min，室温冷却后PBS冲洗3次；用3%H2O2室温（10 min）灭活内源性酶，PBS冲洗3次；湿盒内滴加5%BSA封闭液，室温（20 min）甩去多余液体，不洗；滴加稀释度为1∶100的一抗，4℃过夜，PBS冲洗3次；滴加生物素化山羊抗兔IgG，37℃下30 min，PBS冲洗3次；滴加试剂SABC，37℃下30 min，PBS冲洗4次（以上PBS浓度均为0.01 mol/L）；DAB显色，室温控制反应，蒸馏水充分洗涤；苏木素轻度复染，梯度酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片，显微镜下观察。每次染色流程均设有对照作为染质量控制标准。阳性对照用Santa Cruz公司已证实的阳性TGFβ1与Smad2/3切片为对照，以PBS代替一抗作为阴性对照，至少由2名有经验的病理医师独立观察切片。 　　1.2.3 结果判定 在200倍视野下随机选取5个视野，记数每个视野中肿瘤上皮细胞的染色情况，取平均值。TGFβ1与Smad2/3阳性着色位于细胞质中呈弥漫或散在的棕黄色颗粒。根据瘤组织中阳性细胞的有无及数量，将其分为阴性（-）：未见阳性细胞；弱阳性（+）：阳性细胞少于10%；阳性（++）：阳性细胞11%～30%；强阳性（+++）：阳性细胞多于30%[7]。 　　1.3 统计学处理 　　采用SPSS 19.0统计学软件包进行数据分析，采用χ2检验或Fisher精确概率法分析TGFβ1与Smad2/3在乳腺癌中阳性表达的差异性，Spearman相关分析TGFβ1与Smad2/3在乳腺癌中阳性表达的相关性。P0.05为差异有统计