喜马拉雅紫茉莉根中Boeravinone C含量HPLC分析.docVIP

喜马拉雅紫茉莉根中Boeravinone C含量HPLC分析 　　摘要：建立HPLC测定喜马拉雅紫茉莉[Mirabilis himalaica （Edgew.） Heim.]药材中Boeravinone C含量的方法。色谱柱为Kromosil 100-5 C18柱（150 mm×4.6 mm，5 μm），流动相为甲醇-水（70∶30，V/V），流速为0.8 mL/min，检测波长294 nm。结果表明，Boeravinone C含量在0.032 4～0.486 0 μg范围内，线性关系良好（R2=0.999 9）；精确度和准确度良好，平均回收率为97.2%。该方法快速、简单，可用于喜马拉雅紫茉莉药材的质量评价。 　　关键词：喜马拉雅紫茉莉[Mirabilis himalaica（Edgew.） Heim.]；Boeravinone C；高效液相色谱 　　中图分类号：O657.7+2 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2014）22-5536-03 　　喜马拉雅紫茉莉[Mirabilis himalaica（Edgew.） Heim.]为紫茉莉科植物，其根的藏药名为“阿夏尕那哈”，是传统藏药的五根之一[1]。藏医名著《蓝琉璃》中记载“阿夏尕那哈根大，味甘，治下半身寒气病、浮肿、黄水病，破结石、肿瘤”。Wang等[2]首先从紫茉莉（M. jalapa L.）根中分离得到了一种鱼藤酮类化合物――Boeravinone C，其结构如图1所示。范海霞[3]也从喜马拉雅紫茉莉根中分离得到了Boeravinone C，并证实Boeravinone C对肺癌细胞株A549、肝癌细胞株Hep G-2、宫颈癌细胞株Hela有较强的抑制作用。本课题组从2007年开始研究喜马拉雅紫茉莉的人工种植，经过近6年探索，已系统掌握了喜马拉雅紫茉莉的人工种植、水肥管理、病虫害防治等关键技术，提高了喜马拉雅紫茉莉的产量，改善了野生喜马拉雅紫茉莉资源匮乏的现状。Boeravinone C有较强的抗肿瘤作用，是喜马拉雅紫茉莉的主要活性成分之一。HPLC法是测定药用植物有效成分的常用方法[4-7]，本试验建立了喜马拉雅紫茉莉根中Boeravinone C的HPLC测定方法，以期为喜马拉雅紫茉莉的人工种植和药材的质量评价提供方法[8]，为相关的藏药开发和利用奠定基础。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料 　　喜马拉雅紫茉莉药材于2012年9月10日采自西藏林芝地区八一镇章麦村藏药材人工种植与示范基地，经西藏大学农牧学院罗建副研究员鉴定为紫茉莉科植物喜马拉雅紫茉莉[Mirabilis himalaica （Edgew.） Heim.]。样品保存于西藏大学农牧学院分子生物学实验室内。 　　Boeravinone C对照品由西南大学药学院陈敏教授实验室自制（纯度98%）。甲醇（色谱纯）购于国药集团化学试剂有限公司，去离子水购于杭州娃哈哈集团有限公司 　　1.2 仪器 　　岛津LC-20高效液相色谱仪（LC-20AD、DGU-20A3R在线脱气、SIL-20A自动进样器、柱温箱、SPD-20A紫外检测器） ，Mettler toledo PL203分析天平、Mettler toledo B-S天平、BUCHI B-491旋转蒸发器、KQ5200型超声波清洗仪、高速多功能粉碎机BL-200型。 　　1.3 方法 　　1.3.1 色谱条件 Kromosil 100-5 C18柱（150 mm× 4.6 mm，5 μm）；流动相为甲醇-水（70∶30，V/V）；流速0.8 mL/min；检测波长294 nm，柱温25 ℃。 　　1.3.2 对照品溶液的配制 称取烘干至恒重的对照品4.05 mg，以甲醇定容至25 mL，配制对照品母液；取对照品母液1 mL，用色谱纯甲醇定容至5 mL，得浓度为0.032 4 mg/mL的对照品工作液。 　　1.3.3 样品前处理 取样品粉碎，过100目筛，烘干至恒重，称取1.000 g左右样品，共3份，加入20 mL甲醇浸泡数分钟，超声提取2次，每次30 min，过滤，合并滤液，滤液用旋转蒸发仪蒸干后用甲醇定容至2 mL，经0.45 μm滤膜过滤，待测。 　　2 结果与分析 　　2.1 方法学分析 　　取上述对照品溶液，分别进样1～15 μL（n=3），以Boeravinone C含量为横坐标、峰面积为纵坐标，其线性回归方程为Y=4.286×105x-3.997×103，R2=0.999 9，线性范围为0.032 4～0.486 0 μg。 　　取对照品溶液，重复进样6次，每次5 μL，以峰面积计算，其RSD为1.09%，表明精密度良好；取同一批样品5份，按“1.3.3”制备样品溶液并测定含量，其RS