姜黄素对宫颈癌Hela细胞株放疗增敏作用及其机制探讨.docVIP

姜黄素对宫颈癌Hela细胞株放疗增敏作用及其机制探讨 　　广东省中医药局课题：姜黄素对宫颈癌放射增敏作用的体内实验研究 项目编 　　摘要：目的：本文主要针对姜黄素，研究其对Hela细胞通过株放疗而产生增敏作用与作用机制进行探讨。方法：取生长期对数宫颈癌Hela细胞行宫颈癌Hela细胞培养，设置宫颈癌Hela细胞照射条件 用6MV Clinac 600C/D加速器在室温下照射。读取宫颈癌Hela细胞计数 并采用MTT法对姜黄毒的辐射敏感性测定。结果： 当辐射剂量大于12Gy时，观察细胞增殖抑制率，结果示不再随作用时间的延长和射线剂量的加大而增加，达坪值，对12Gy剂量射线加不同浓度姜黄素于Hela细胞作用的结果选取，显示出随药物浓度的增加，细胞增殖抑制率可有升高，当浓度gt;12μmol/L时，曲线呈平坦状。药物加辐射后，相较单纯辐射或单纯药物组，24h细胞增殖抑制率均有差异（见图1）。可能为临床常规放疗剂量，及姜黄素同时具杀伤细胞作用，为防两者联合加大细胞杀伤程度，故对4Gy射线剂量加姜黄素25μmol/L选择，行后续增敏试验研究。结论：用MTT法对姜黄素及射线对宫颈癌细胞的抑制作用分别检测，最佳的姜黄素工作浓度为25μmol/L，射线最佳工作剂量为4Gy，证实姜黄素对宫颈癌Hela细胞有放疗增敏作用。而能对此病的医治提供有效的治疗方法，使得康复率更高，推动医学的发展。 　　关键词：姜黄素;宫颈癌 ;Hela细胞 ;株放疗 ;增敏作用 　　姜黄素指的是一种色素，其主要是从姜科植物（如郁金，姜黄，莪术等）和天南星科植物（如菖蒲等）中提取的。经研究证明，发现姜黄素不仅能为一些食品着色和作酸碱指示剂，在医学上还能够医治炎症，具有抗氧化和抗类风湿的作用，除此之外，还具有降血脂，抗肿瘤，利胆等作用。并且美国VITY维他命杂志的报道也证实了这样的说法，报道称：“姜黄素的主要药理作用有抗氧化、抗炎、抗凝、降脂、抗动脉粥样硬化、抗衰老消除自由基及抑制肿瘤生长等。”2006年11月，美国《关节炎与风湿病》期刊一篇文章也指出：“姜黄素可以防止关节肿大、关节炎，对心血管疾病、癌症等有效”。由于姜黄素本身的抗氧化性，它可以选择性的抑制蛋白酪氨基酸酶和血小板来源的生长因子受体，从而能抑制细胞的无序增殖，并且使其凋亡，从而达到抵抗肿瘤细胞的目的，其抗癌作用，在临床医学的应用上十分广泛。本文就对宫颈癌Hela细胞株放疗增敏的作用及机制展开探讨，现总结结果如下。 　　1 资料与方法 　　1.1 一般资料 以人宫颈癌HeLa细胞株为实验细胞，实验试剂为姜黄素粉剂，将其在二甲基亚砜（DMSO）溶液溶解，制成姜黄素母液，为1mg/ml，于-20度冰箱储存备用，用含10%新生牛血清的RPMI-1640培养液稀释达所需浓度。 　　1.2 方法 　　1.2.1宫颈癌Hela细胞培养 （1）取生长期对数宫颈癌Hela细胞，将培养瓶内的培养液吸出弃掉，取PBS清洗悬浮细胞适量加入，将PBS用刻度吸管吸出弃掉。（2）取0.25%胰酶适量加入消化，显微镜下对细胞形态变化观察，当宫颈癌Hela细胞的胞体变圆，间隙变大时，将胰酶吸出，取10%RPMI-1640培养液适量加入对消化终止。（3）取无菌弯头吸管对细胞小心吹打，制成单细胞悬液，取适量在另一培养瓶中接种。 　　1.2.2 宫颈癌Hela细胞照射条件 用6MV Clinac 600C/D加速器在室温下照射。 　　1.2.3 宫颈癌Hela细胞计数 选取于培养瓶底部均匀铺满的一瓶细胞，行PBS清洗，取0.25%胰酶适量进行消化，将胰酶吸出，加入培养液终止消化，制成单细胞悬液备用，将计数板于低倍镜下放置观察并计数。观察放射线对宫颈癌Hela细胞增殖产生的影响。掌握姜黄素对宫颈癌Hela细胞产生的细胞毒性。采用MTT法对姜黄毒的辐射敏感性测定。 　　1.3 统计学方法 所有数据同规格采用SPSS10.0软件处理，组间比较采用X2检验，具有差异统计（Plt;0.05）。 　　2 结果 　　当辐射剂量大于12Gy时，观察细胞增殖抑制率，结果示不再随作用时间的延长和射线剂量的加大而增加，达坪值，对12Gy剂量射线加不同浓度姜黄素于Hela细胞作用的结果选取，显示出随药物浓度的增加，细胞增殖抑制率可有升高，当浓度gt;12μmol/L时，曲线呈平坦状。药物加辐射后，相较单纯辐射或单纯药物组，24h细胞增殖抑制率均有差异（见图1）。可能为临床常规放疗剂量，及姜黄素同时具杀伤细胞作用，为防两者联合加大细胞杀伤程度，故对4Gy射线剂量加姜黄素25μmol/L选择，行后续增敏试验研究。 　　图1 宫颈癌细胞增殖受姜黄素联合射线的影响 　　表1两组疗效及治疗时间对比 　　注：与对照组比