宫颈癌中CyclinD1Ki67P53表达及与HPV1618DNA感染相关性研究.docVIP

宫颈癌中CyclinD1Ki67P53表达及与HPV1618DNA感染相关性研究 　　摘要：目的探讨细胞周期因子CyclinD1、Ki-67、P53和HPV16/18在宫颈液基细胞上皮内病变（CIN）及宫颈癌组织中的表达及其临床意义，研究HPV16/18感染与CyclinD1、Ki-67和P53蛋白表达的关系。方法采用免疫组化（S-P）方法和原位杂交技术检测50例宫颈癌组织、22例宫颈CIN以及20例正常宫颈组织中的CyclinD1、Ki-67、P53蛋白和HPV16/18DNA的表达情况。结果CyclinD1、Ki-67、P53蛋白和HPV16/18DNA在宫颈癌及CIN组中的阳性率分别为68.0%、84.0%、60.0%、80%；63.6%、68.2%、54.5%、72.7%均显著高于正常宫颈组织10.0%、15.0%、0.0%、10.0%。且四者在宫颈癌中的阳性表达率与临床分期、病理分级有关且呈递增趋势（P0.05），另外HPV16/18DNA表达与CyclinD1、Ki-67和P53蛋白表达之间呈正相关（P0.01）。结论CyclinD1、Ki-67和P53在CIN及宫颈癌组织中高表达，HPV16/18病毒感染与宫颈癌发生发展密切相关，并与CyclinD1、Ki-67和P53蛋白表达呈正相关，四者均可作为临床宫颈癌筛查指标。 　　关键词：宫颈癌；HPV16/18DNA 　　宫颈癌是女性生殖系统发病率处于第一位的恶性肿瘤，且近年来呈年轻化趋势。人乳头瘤病毒16，18（HPV16/18）感染与宫颈癌的发病密切相关。其与细胞增殖密切相关，可通过与细胞周期调控蛋白相互作用，促进细胞无限制增长而致癌[1]。原癌基因细胞周期素D1（CyclinD1）及细胞增殖抗原Ki-67都有促进细胞增殖作用，其在人类多种细胞系及肿瘤细胞中存在表达异常，引起蛋白的异常表达，促使肿瘤的异常发生。P53基因则是重要的抑癌基因，其突变或失活可促使多种肿瘤的发生[2]。本文采用免疫组化（S-P）方法和原位杂交技术检测宫颈癌组织、宫颈CIN以及正常宫颈组织中的CyclinD1、Ki-67、P53蛋白和HPV16/18DNA的表达情况。结合临床资料探究HPV16/18感染与CyclinD1、Ki-67和P53蛋白表达的关系。 　　1资料与方法 　　1.1一般资料收集合肥市第一人民医院病理科2010年4月~2013年12月的行宫颈活检或手术切除且经病理确诊的宫颈癌50例，术前均未行放疗、化疗或激素治疗。年龄29~74岁，平均年龄46.7岁。按FIGO分期标准，Ia期10例、Ib期16例、IIa期24例。病理分级中，I级10例、II级23例、III级17例。宫颈CIN组织22例。正常宫颈组织20例。全部标本经10%甲醛溶液固定，石蜡包埋，厚度3~4um。正常宫颈组织的平均年龄43.4岁。 　　1.2免疫组化标记方法浓缩型兔抗人CyclinD1单克隆抗体、鼠抗人Ki-67单克隆抗体、鼠抗人P53单克隆抗体，均购于福州迈新生物技术开发有限公司。具体染色步骤包括：脱蜡和水化，高压加热柠檬酸型组织抗原修复液，阻断内源性过氧化物酶，分别加此三者抗体中的一种或空白对照试剂，加酶标聚合物，显色，复染，脱水、透明、封片。 　　1.3原位杂交HPV16/18原位杂交检测试剂盒购于中山大学达安基因股份有限公司。杂交检测具体操作步骤参照试剂盒说明书。 　　1.4结果判断CyclinD1、Ki-67及P53阳性染色主要定位于细胞核，均以出现棕黄色颗粒为标志。阳性标记细胞的平均百分率5为阳性。HPV16/18原位杂交以细胞核内出现紫兰色颗粒为阳性标志。 　　1.5统计学处理应用SPSS17.0统计软件进行χ2检验和Fishers确切概率法分析，相关性分析采用非参数Spearman等级相关分析。 　　2结果 　　2.1 CyclinD1、Ki-67、P53和HPV16/18在不同宫颈上皮组织中的表达CyclinD1、Ki-67、P53的阳性表达均位于细胞核内，见图1~6，50例宫颈癌中CyclinD1阳性表达34例，阳性表达率为68%，Ki-67阳性表达42例，阳性表达率为84%，P53阳性表达30例，阳性表达率为60%，见表1。 　　 　　 　　 　　 　　 　　 　　 　　 　　 　　 　　 　　 　　 　　 　　 　　 　　 　　 　　 　　 　　 　　 　　 　　 　　 　　2.2 CyclinD1、Ki-67、P53及HPV16/18的表达与宫颈癌临床病例因素间关系，见表2。