茶饮料微生物检验方法.docVIP

饮料微生物检测方法 1、目的： 通过检测将产品中的微生物状况真实反应出来。 2、范围： 适用于所有成品 饮料的微生物检测。 3、工作程序： 3.1 测试方法 ：采用膜过滤测试法（采用滤膜为0.45um）。 3.2培养基和试剂 3.2.1伊红美蓝琼脂培养基(用于测试饮料成品中的大肠菌群) 称取37.5g伊红美蓝琼脂培养基溶于1L蒸馏水中,加热溶解,121℃15分钟高压灭菌。最好根据样品数量配制培养基，现配现用，一次性用完。 3.2.2乳糖胆盐培养基配制方法（用于验证样品中的大肠菌群） 称取35g乳糖胆盐培养基溶于1L蒸馏水中，加热煮沸至完全溶解，分别装于有倒立发酵管的试管中，115℃，15分钟，高压灭菌，现用现配，一次用完。 3.2.3平板计数琼脂(用于测试成品茶饮料中的细菌总数) 用电子称准确称取23.5g平板计数琼脂溶于1L蒸馏水中,加热煮沸至完全溶解,分装,121℃15分钟高压灭菌。最好根据样品数量配制培养基，现配现用，一次性用完。 3.2.4马铃薯葡萄糖琼脂(用于测试成品茶饮料中的霉/酵母菌) 用电子称准确称取38g马铃薯葡萄糖琼脂溶于1L蒸馏水中, 加热煮沸至完全溶解, 分装,121℃15分钟高压灭菌。最好根据样品数量配制培养基，现配现用，一次性用完。 3.2.5若培养基经过消毒后已凝固,使用之前需将装有培养基的瓶子放在微波炉进行溶解。培养基灭菌后，应在无菌室超净工作台内采用火焰消毒操作法往每个培养皿中倒入16-18毫升培养基，培养基凝固后，将培养皿倒置放入冰箱备用。 3.3取样：成品饮料取样为当天生产的产品，采用直接取样法，以每罐为一批进行检测。 3.4做样：将膜过滤支架放在超净工作台上，确定其阀门处于关闭状态，用火焰对其上端进行灭菌，在取用已经灭菌的滤器（牛皮纸包裹121℃灭菌15分钟）之前，用酒精棉球擦拭双手，安装滤斗，将镊子在酒精灯火焰区灭菌，待凉后，开启无菌滤膜的外包装，用镊子夹取滤膜置于滤斗上，安装滤杯，注意刻度向外，夹上弹簧夹，取300毫升样品倒入滤杯，启动抽滤泵，马上开启阀门过滤，过滤完毕后，关闭抽滤泵，取下弹簧夹，拿下滤杯，用酒精棉球擦拭剪刀，与镊子一起在酒精灯火焰区灭菌，待凉后，用镊子夹住，用剪刀将滤膜均匀 剪成三部分，取一小部分置于带有伊红美蓝琼脂培养基的培养皿中；取一部分置于带有平板计数琼脂的培养皿中；取一部分置于马铃薯葡萄糖琼脂的培养皿中。 3.5培养：将带有伊红美蓝琼脂培养基的培养皿，倒置于36℃～38℃恒温恒湿培养箱中，24±2小时后记录结果；将带有平板计数琼脂的培养皿，倒置于36℃～38℃恒温恒湿培养箱中，48±2小时后记录结果，将带有马铃薯葡萄糖琼脂的培养皿，倒置于25℃～28℃恒温恒湿培养箱中，72小时后开始观察，120小时后记录结果。 3.6报告： a细菌平板：对平板进行计数，以每100毫升所含菌落总数表示。 b.大肠菌群：对平板的菌落总数进行计数,有可疑大肠菌群特征的菌落（紫红色中间带金属光泽的菌落），并挑取此种菌落1～2个进行革兰氏染色，同时接种乳糖复发酵管，置于36℃～38℃恒温恒湿培养箱内，培养24±2小时，观察产气情况。凡乳糖管产气、革兰氏染色为阴性的无芽孢杆菌，即可报告为大肠菌群阳性。或采用3M大肠菌群培养基快速培养。 c.霉/酵母菌平板：对滤膜上的菌落总数进行计数，以每100毫升所含菌落总数表示。