Th17细胞及其相关细胞因子在幽门螺杆菌感染中的作用研究-免疫学专业论文.docxVIP

PAGE PAGE 10 Ionomycin Ionomycin calcium 钙离子载体 OD optical density 光密度 PAGE polyacrylamide gelelectrophoresis 聚丙烯酰胺凝胶电泳 PBS phosophate buffered saline 磷酸盐缓冲液 PCR Polymerase chain reaction 聚合酶链式反应 PE phycoerythrin 藻红蛋白荧光素 PMA Phorbol myristate acetale 乙酸佛波酯 PMSF phenylmethyl sulfonylfluoride 苯甲基磺酰氟化物 r/min revolutions per minute 转/分 RPMI-1640 roswell park memorial institute 1640 medium RPMI-1640 培养基 RT-PCR Reverse transcriptase PCR 逆转录 PCR SDS sodium dodecyl sulphate 十二烷基硫酸钠 TAE Tris/acetate/(buffer) Tris/乙酸电泳缓冲液 TBS Tris-buffered saline Tris 缓冲盐溶液 TBST Tris-tween-20 buffered saline Tris-吐温 20 缓冲盐溶液 TEMED N,N,N’,N’ -tetramethylethylenediamine N,N,N′,N′-四甲基乙胺 Tris Tris-(hydroxymethyl) aminomethane 三羟甲基氨基甲烷 TNF tumor necrosis facter 肿瘤坏死因子 WCP Whole cell protein 全菌蛋白 WHO World Health Organization 世界卫生组织 Th17 细胞及其相关细胞因子在幽门螺杆菌感染中的作用 研究 硕士研究生：刘亚普 导 师：张 艳 教授 中 文 摘 要 目的：通过建立幽门螺杆菌（H. pylori）感染的 C57BL/6 小鼠模型，分析感染 后不同时期小鼠胃组织 IL-17、IL-23 mRNA 及蛋白表达情况，以及脾脏单细胞 悬液中 Th17 细胞应答情况，并分析感染后胃炎的严重程度与 Th17-IL-17 应答效 应的相关性，同时设立治疗组检测上述指标的变化情况。为探讨 IL-23/IL-17 信 号通路在 H. pylori 感染中的作用奠定基础，为 H. pylori 诱发的胃炎的免疫防御 及治疗提供新的理论和实验依据。 方法： (1) 对6～8周龄的C57BL/6小鼠进行灌胃感染H. pylori，每隔48小时一次，共灌胃 5次。在H. pylori感染后的4、8、12周分别处死小鼠，鉴定H. pylori感染小鼠模型 是否成功。同时设立治疗组，采用三联疗法对灌胃感染4周后的小鼠进行治疗； (2) 对对照组、感染组、治疗组小鼠分别取部分胃组织作H﹠E染色，显微镜下观 察胃组织炎症变化； (3) 采用Trizol法对胃组织及脾细胞提取RNA，RT-PCR检测细胞因子IL-17、IL-23 mRNA的表达情况； (4) ELISA检测胃组织匀浆上清中细胞因子IL-17、IL-23蛋白含量； (5) 采用PMA+Ionomycin或H. pylori WCP对脾淋巴细胞进行刺激培养，流式细胞 术检测脾脏单细胞悬液中Th17细胞应答情况。 结 果： (1) 成功建立了H. pylori感染小鼠模型，感染组小鼠胃黏膜炎症程度随感染时间 的延长而不断加重； (2) 与对照组相比，H. pylori感染组小鼠的胃组织中IL-17、IL-23的表达在mRNA 及蛋白水平均显著增高，H. pylori感染组小鼠的脾淋巴细胞中Th17细胞比例显著 高于对照组小鼠的该比值； (3) H. pylori感染组小鼠IL-17、IL-23 mRNA及蛋白含量以及脾淋巴细胞中Th17细 胞比例随感染时间延长而增加； (4) 治疗组小鼠IL-17、IL-23表达量及脾淋巴细胞中Th17细胞比率，与治疗前即 感染后4周的小鼠相比较均有所下降； (5) 感染后不同时期小鼠胃黏膜的炎症程度与IL-17、IL-23的表达量存在正相关。 结 论： (1) H. pylori 感染后 IL-17、IL-23 表达均上调； (2) H. pylori 感染后可以诱导 Th17 细胞应答； (3) H. pylori 感染后胃炎程度与胃组织 IL-17、IL-23 含量存在正相关。 关键词：幽门螺杆菌；Th17；白介素-23；白介素-17 本研究受以下课题资助： 1、湖南省自然科学基金重点