Tie2信号系统激活对血管内皮细胞的保护作用-儿科学专业论文.docxVIP

Tie2 信号系统激活对血管内 Tie2 信号系统激活对血管内皮细胞的保护作用 中文摘要 I I PAGE IV PAGE IV Tie2 信号系统激活对血管内皮细胞的保护作用 中文摘要 研究背景：微血管内皮损伤是急性肾损伤和慢性肾脏疾病共同的病理改变，贯穿 于它们的发生、发展过程。与肾小管上皮细胞相比，肾微血管内皮细胞缺乏有效的再 生能力，当肾功能恢复到正常水平以后，肾周微血管密度的降低或丢失的病变仍将长 期存在，最终将导致慢性肾小管间质纤维化。Tie2 信号系统被认为在血管内皮的保护 方面起着重要的作用，研究中该信号系统的激活多应用 Ang-1，但也有研究显示 Ang-1 促进急性肾损伤，炎症细胞浸润，后期促进肾纤维化。因而我们集中研究 Tie2 信号 对血管内皮的保护作用。 目的：本研究建立脂多糖诱导的血管内皮细胞损伤，探讨 Tie2 信号系统激活对 血管内皮细胞是否具有保护作用。为后期进一步研究提供依据。 方法：第一部分 离体培养人脐静脉血管内皮细胞 HUVEC，以 4×104 接种于 96 孔板，200ul/孔。分别以浓度 0ug/ml，0.125 ug/ml，0.25 ug/ml，0.5 ug/ml，1 ug/ml， 2 ug/ml，5 ug/ml，10 ug/ml 的 LPS 刺激损伤细胞。孵育 24 小时，采用 cck8 法测定细 胞活性。根据结果选择适宜的 LPS 浓度，建立细胞损伤模型。第二部分 根据第一部 分结果选择 LPS 刺激浓度为 10 ug/ml。细胞分为三组：正常对照组；LPS 组；LPS+Tie2 单抗组。应用 Elisa 技术检测孵育 24 小时后各组细胞上清 sVCAM-1 的表达水平。应 用 PCR 技术检测孵育 6h 后各组细胞 VCAM-1 mRNA 的水平变化。应用 PCR 技术检 测孵育 6h 后各组细胞凋亡相关基因 Bax、Bcl-2 的水平变化。应用 WESTERN BLOT 技术检测孵育 24、48 小时后，各组细胞α -SMA 的表达水平的变化。 结果：第一部分 cck8 结果显示，内皮细胞被不同浓度 LPS 损伤刺激后，各浓度 LPS 均对细胞增殖活性产生抑制作用，与正常细胞比较差异有统计学意义（P0.05）。 第二部分 采用 10 ug/ml LPS 刺激损伤细胞后，LPS 组细胞上清 sVCAM-1 分泌 量与 VCAM-1 mRNA 较空白对照组明显升高（P0.05）。加入 Tie2 激发单抗后水平 下降（P0.05）。孵育 6h 后，LPS 组细胞 BaxmRNA 与 BaxmRNA/Bcl-2mRNA 较空 中文摘要 Tie2 信号系统激活对血管内皮细胞的保护作用 白对照组明显升高(P0.05)。加入 Tie2 激发单抗后水平下降（P0.05）。各组 Bcl-2 基因水平无明显差异（P0.05）。孵育 24h 及 48h 后，LPS 组细胞α -SMA 水平较空 白对照组明显升高(P0.05)。加入 Tie2 激发单抗后水平下降（P0.05）。 结论: 1.LPS 可引起血管内皮细胞不同程度损伤，Bax 基因表达增加提示细胞凋 亡增加，VCAM-1 表达增加提示细胞发生炎症反应，α -SMA 水平升高，提示细胞发 生了转分化。2.加入 Tie2 激发单抗后，细胞 VCAM-1 蛋白与基因水平低表达、Bax/Bcl-2 下降说明 Tie2 信号系统激活对血管内皮细胞具有抗炎、抗凋亡的作用。3.加入 Tie2 激发单抗后，细胞α -SMA 表达水平下降，说明 Tie2 激发单抗可以抑制细胞向肌成纤 维细胞方向转分化。 关键词：Tie2 信号；微血管内皮细胞损伤；炎症反应；凋亡；Endo-MT 作 者:王 震 指导老师:李晓忠 Acti Activation of Tie2 signaling pathway in vasculature protection Abstract Activation of Tie2 signaling pathway in vasculature protection Abstract Background： The peritubular capillaries injury plays the same important roles in the pathogenesis of both acute kidney injury and progression to chronic kidney disease.Compared with the renal tubular epithelial cells, renal micr