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提高小麦叶枯菌筛选敏感度方法 　　摘要：为了提高先导化合物杀菌活性筛选敏感度，选用小麦叶枯菌（Mycosphaerella graminicola）作为供试靶标，比较了半固体法杀菌活性筛选中的不同单孢子纯培养对标准样品杀菌活性的敏感度。结果表明，小麦叶枯菌不同单孢子纯培养，对标准样品的敏感度差异显著。基于以上结果，使用微生物源发酵提取物对敏感的单孢子纯培养和对照培养物进行了验证筛选。结果表明，对1 920个样品的筛选中，敏感的单孢子纯培养比对照培养物的活性样品检出率提高2.24%，活性样品检出数量增加54.43%。 　　关键词：小麦叶枯菌（Mycosphaerella graminicola）；先导化合物；筛选敏感度；半固体法；单孢子 　　中图分类号：S482.2；S435.121.4+8 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2017）23-4510-03 　　DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2017.23.022 　　Abstract： To improve sensitivity for fungicidal activity screening of lead compounds，Mycosphaerella graminicola was selected as test target to compare the sensitivity of different pure cultures from single spore to fungicidal activity of standard samples in semisolid fungicide screening. The results showed that sensitivity was significant different between different pure cultures. Based on above results， the sensitive pure culture and the reference culture were verified and screened with microbial fermentation extracts， it was concluded that in screening of 1 920 samples， the hits rate of sensitive pure culture rose by 2.24% and the number of hits increased 54.43% comparing with the reference culture. 　　Key words： Mycosphaerella graminicola； lead compound； sensitivity of screening； semisolid screening； single spore 　　在杀菌剂的先导化合物筛选中，样品的杀菌活性强度是化合物和供试靶标菌在特定环境条件下的协同表现，因此，它不仅与化合物自身的杀菌特性有关，同时也受供试靶标菌的敏感性、测试培养时间、培养温度以及化合物在培养过程中的降解等因素的影响。在微生物源先导化合物高通量筛选体系中，筛选敏感性的提高就等同于提高了整个筛选流程的筛选效率，提高样品的利用率，也减少了新化合物的漏筛。 　　1 材料与方法 　　1.1 试验材料 　　1.1.1 小麦叶枯菌（Mycosphaerella graminicola） 本?验中使用的小麦叶枯菌，是以ATCC 62714为原始菌株，菌种保存温度为-70 ℃，经过弹土法活化，再进行单孢子分离纯化。 　　1.1.2 杀菌剂标准样品 嘧菌酯（Azoxystrobin 95%）、咪鲜胺（Prochloraz 98%）。 　　1.1.3 试剂 无水乙醇，PDA、PDB培养基，琼脂粉，以上试剂均为市售生化试剂。 　　1.1.4 微生物源提取物 由湖北省生物农药工程研究中心微生物资源研究室提供。 　　1.1.5 主要仪器、设备 血球计数板、光学显微镜、高压灭菌锅、超声波振荡器、电子移液器（MCE8k）、Intega 96通道移液机、96孔组织培养板（深孔）、96孔组织培养板（浅孔）、人工气候箱（光、温可调）、超净工作台。 　　1.2 试验方法 　　1.2.1 小麦叶枯菌单孢子纯培养制备[1] 原始菌株冻干粉（ATCC 62714）以弹土法在PDA培养基上进行单菌落分离培养，培养2周后，选取分界清晰的菌落7个，进行扩大培养，培养3周备用。小麦叶枯菌（Mycosphaerella graminicola）孢子悬浮