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杏鲍菇多糖提取方法比较 　　摘要：以单因素试验、正交试验、验证性试验设计为基本研究方法，以杏鲍菇多糖提取率为评价指标，确定2种辅助方法提取杏鲍菇多糖的优组合条件及2种优组合的比较。结果表明，微波辅助提取多糖的优组合是微波功率为500 W，浸提时间6 min，料液比1 g ∶30 mL，浸提次数为5次，多糖提取率为3.64%。恒温水浴振荡辅助提取多糖的优组合是速度为225 r/min，浸提时间100 min，料液比1 g∶30 mL，浸提次数为4次，浸提温度65 ℃，多糖提取率为346%。结果微波辅助法优于水浴振荡辅助法，2者杏鲍菇多糖得率差异显著。 　　关键词：杏鲍菇多糖；微波；恒温水浴振荡；提取；比较研究 　　中图分类号： TS201.1文献标志码： A文章编号：1002-1302（2015）02-0259-04 　　收稿日期：2014-04-21 　　作者简介：朱月（1958―），女，辽宁黑山人，教授，现从事生物化学教学和食用菌多糖研究。E.mail：cfzy212@126.com。杏鲍菇[PLeurothus eryngii（DC.：Fr.）Quel]，别称刺芹侧耳，属口蘑科侧耳属[1]。现代药理学研究表明，杏鲍菇中所含的多糖能增强机体免疫，具有抗病毒、抗肿瘤、抗氧化、降低机体胆固醇含量、防止动脉硬化等作用[2-3]。筛选杏鲍菇多糖提取的最佳方法，提高多糖提取率，对于杏鲍菇多糖的有效利用与开发，提高其经济价值、保健价值和药用价值具有十分重要的意义。水浴振荡及微波辅助提取杏鲍菇多糖技术[4-5]已有报道，但关于2种辅助法提取杏鲍菇多糖的比较研究目前还未见报道。本试验通过对水浴振荡辅助法与微波辅助法提取杏鲍菇多糖技术的比较研究，进一步优选杏鲍菇多糖提取技术，提高杏鲍菇多糖的产率，为杏鲍菇资源的开发和利用提供技术手段。 　　1材料与方法 　　1.1材料 　　1.1.1材料与试剂市售新鲜的杏鲍菇。浓硫酸、苯酚、无水乙醇、葡萄糖，以上试剂均为分析纯。 　　1.1.2仪器与设备电热鼓风干燥箱（CS101-AB型）；分光光度计（UV-9600）；恒温水浴振荡器（国华SHA―）；试验专用微波炉（NJL07-3型）；电子天平（PL203）；离心机（DD-5M）；500～5 000 μL（Eppendorf Research）移液枪等。 　　1.2方法 　　1.2.1材料预处理将新鲜杏鲍菇用清水洗净沥干，烘干粉碎，过100目筛，收集粉末干燥至恒质量，备用。 　　1.2.2葡萄糖标准曲线的制作采用苯酚-硫酸法测定不同标准葡萄糖浓度下的吸光度，以葡萄糖浓度为横坐标、吸光度为纵坐标，采用Excel制作葡萄糖标准曲线[6]，求出多糖含量的直线方程。 　　1.2.3最适辅助条件的确定设定浸提条件为试验的固定因素，微波功率、水浴振荡速度为试验的可变因素，以多糖提取率为评价指标，通过单因素试验和统计学分析，确定杏鲍菇粗多糖提取的最适微波功率和最适水浴振荡速度。 　　1.2.4最适辅助条件下粗多糖提取条件水平的确定分别以试验确定的最适辅助条件为固定因素，以设定的浸提条件中的任一条件为可变因素，其他浸提条件为固定因素进行单因素试验。每个单因素试验重复3组。以多糖提取率为评价指标，采用SPSS 17.0软件进行单因素方差分析或Kruskal-Wallis 检验，分别比较相同浸提条件不同水平对多糖提取的影响程度，确定单因素水平。 　　1.2.52种辅助方法的优选及比较分别在最适辅助条件下，依试验所确定的单因素水平进行正交设计和试验。采用Excel和SPSS 17.0软件进行统计学分析[7]，确定2种辅助方法提取杏鲍菇多糖的优组合浸提条件并比较差异程度。 　　1.2.6验证性试验采用正交试验确定的提取杏鲍菇多糖的优组合浸提条件进行验证性试验（试验重复3次），所得的多糖产率与正交试验各组所得的多糖产率进行比较，判断优组合条件的可靠性、可重复性和稳定性。采用t检验和单因素方差分析的统计学方法对2种辅助方法进行比较分析。 　　2结果与分析 　　2.1葡萄糖标准曲线及杏鲍菇多糖提取率计算方法 　　葡萄糖标准曲线回归方程y=0.006 2x+0.004 5。相关系数r=0.997 6。说明葡萄糖浓度在30～150 μg/mL范围内，葡萄糖浓度与吸光度呈线性关系（图1）。 　　根据回归方程及试验的相关操作，杏鲍菇多糖提取率计算方法如下：多糖提取液多糖质量浓度（μg/mL）=（D值-0.004 5）/0.006 2；多糖提取率=（多糖质量浓度×多糖提取液总体积）/杏鲍菇干粉质量×100%。 　　2.2杏鲍菇多糖辅助条件优选结果 　　在其他浸提条件不变的条件下，杏鲍菇多糖的提取率随着微波功率的提高而呈现上升趋势，当微波功率达到该微波