松筋通络方对胶原性关节炎大鼠血清IL―1IL―1βTNF―α及滑膜病理影响.docVIP

松筋通络方对胶原性关节炎大鼠血清IL―1IL―1βTNF―α及滑膜病理影响 　　【摘 要】目的：探讨松筋通络方对胶原性关节炎模型大鼠血清肿瘤坏死因子-α、白细胞介素-1、白细胞介素-1β表达水平的影响。方法：将40只5周龄Wistar雌性大鼠，随机分为空白对照组、模型对照组、雷公藤对照组和松筋通络方组，每组10只。采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测胶原诱导性关节炎大鼠血清肿瘤坏死因子-α、白细胞介素-1、白细胞介素-1β表达。结果：松筋通络方和雷公藤能够下调胶原诱导性关节炎大鼠血清致炎因子肿瘤坏死因子-α、白细胞介素-1、白细胞介素-1β的表达 　　（P 0.01），而松筋通络方在降低白细胞介素-1、白细胞介素-1β方面优于雷公藤（P 0.05）。结论：松筋通络方通过下调白细胞介素-1、白细胞介素-1β、肿瘤坏死因子-α的表达，从而控制关节炎症发展，阻止病情进展。 　　【关键词】 胶原性关节炎；松筋通络方；白细胞介素-1；白细胞介素-1β；肿瘤坏死因子-α；大鼠 　　类风湿关节炎（rheumatoid arthritis，RA）是一种以慢性滑膜炎为基本病理特征的自身免疫性疾病，主要累及外周关节，表现为慢性、对称性多关节炎。RA病因不明确，但研究发现，白细胞介素-1（IL-1）、 　　白细胞介素-1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）等细胞因子是造成滑膜炎症及关节破坏的主要因素[1]。松筋通络方具有祛风除湿、通络止痛之效，临床用于治疗RA获得较好的疗效。本研究通过建立胶原性关节炎（CIA）大鼠模型，观察松筋通络方对大鼠关节血清IL-1α、IL-1β、TNF-α浓度的影响，以探讨松筋通络方的抗炎作用机制。 　　1 实验材料 　　1.1 实验动物 选取SPF级5周龄Wistar雌性大鼠40只，体质量（160±20） g，购置于重庆滕鑫生物技术有限公司，合格证号SCXK（京2011-0004），饲养环境保持室温20～25 ℃、湿度70%左右，自由进食，自由饮水，适应环境1周后开始实验。 　　1.2 试剂与药物 牛Ⅱ型胶原（Collagen Type II）货号C7806-2，美国Sigma公司生产；完全弗氏佐剂（Freunds complete adiuvant，FCA）货号F5881，美国Sigma公司生产；Rat TNF-α ELISA KIT 批号1027189，Rat IL-1 ELISA KIT批号1027190，Rat IL-1β ELISA KIT 批号1027335，北京惠康生物科技有限公司生产。松筋通络方药液的制备：松筋通络方由松萝50 g、四楞筋骨草20 g、八角枫根6 g、重楼10 g、当归10 g、虎杖20 g、皂角子10 g、麻黄10 g、天麻20 g等药物组成，购于贵州凯丰医药公司，将药物放入砂罐中加双倍体积蒸馏水浸泡30 min，上火煎煮至水沸20 min，滤出药液，再加入双倍蒸馏水重复煎煮，两次药液混合后经水浴浓缩至约2 g?mL-1，4 ℃冰箱密封保存备用。雷公藤多苷：雷公藤多苷片研磨成粉，加蒸馏水配置成浓度为1.2 mg?mL-1的混悬液，湖南协力药业有限公司生产，批号 　　1.3 主要仪器 恒温水浴锅，型号DZKW-4，南昌市恒顺化验设备制造有限公司生产；自动酶标读数仪，型号EIX80IU，美国产品；脱色摇床，型号TY-80S，国立常州试验设备研究所生产；洗板机，型号AT-828，上海康为医疗科技发展有限公司生产。 　　2 方 法 　　2.1 造 模 随机选取10只大鼠为空白对照组，其余大鼠参照李小峰等[2]的造模方法制作动物模型。将牛II型胶原与0.1 M冰醋酸溶液混匀，与弗氏完全佐剂按1∶1充分混合、乳化，取充分乳化的造模用胶原溶液0.4 mL于大鼠尾根部、脊背部、后足等多点皮内注射以初次免疫。1周后再次加强免疫1次，观察大鼠关节肿胀情况。 　　2.2 分组和给药 将造模成功的大鼠分为模型对照组、雷公藤对照组、松筋通络方组，每组10只。雷公藤对照组和松筋通络方组，从第2次免疫后第1 d开始灌胃给药，给药量=（成人1 d用药量/成人体质量）×6.25×大鼠体质量[3]，根据大鼠体质量计算每只大鼠所需药量。雷公藤对照组每次给予药液1.3 mg?kg-1（约2 mL），松筋通络方组每次给药液2 mL（约含生药4 g），空白对照组和模型对照组灌胃2 mL生理盐水，每日1次，连续灌胃28 d后处死大鼠。 　　2.3 IL-1、IL-1β、TNF-α浓度测定 取血4～6 mL， 　　室温静置30 min后置3 000 r?min-1离心机离心 　　15 min，用吸液管取血清。将准备好的样品和标准品加入板孔内，在37 ℃孵育箱上温孵30