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枸杞多糖对NK细胞杀伤活性影响 　　【中图分类号】R733.7【文献标识码】A【文章编号】1672－3783(2012)03－0343－01 　　 【摘要】目的：观察枸杞多糖作用前后人白血病细胞株HL-60表面MICA的表达变化及对NK细胞杀伤活性的影响，为白血病免疫治疗打下实验基础。方法：用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测不同浓度枸杞多糖作用前后HL-60细胞培养上清中MICA的浓度；MTT法对不同浓度枸杞多糖作用前后NK细胞对HL-60杀伤活性的变化进行检测。结果：ELISA检测显示不同浓度枸杞多糖（6mg/ml,8mg/ml,10mg/ml）作用后HL-60细胞培养上清中MICA的浓度分别为(18.314±0.926)ng/l;(22.049±1.207)ng/l;(27.509±1.859)ng/l与作用前浓度(11.226±0.652)ng/l相比,差异有统计学意义 （P0.05）；MTT法检测显示效靶比5：1、10：1、20：1时，不同浓度枸杞多糖作用后NK细胞对HL-60细胞的杀伤性分别为：浓度为6mg/ml时，NK细胞对HL-60细胞的杀伤率分别为（19.59±0.47）％、（27.46±0.83）%、（38.43±1.68）％；浓度为8mg/ml时，NK细胞对HL-60细胞的杀伤率分别为（27.86±0.75）%、（39.30±1.86）%、（48.94±2.80）%；浓度为10mg/ml时，NK细胞对 HL-60细胞的杀伤率分别为 （34.50±1.20）%、（41.28±2.38）%、（51.02±3.72）%；以上结果均高于作用前NK细胞对HL-60的杀伤率（13.64±0.25）%、（22.41±0.36）%、（31.72±0.62）%，差异有统计学意义（P0.05）。结论：本实验结果提示：枸杞多糖能上调HL-60细胞表面MICA的表达率， 增强NK细胞的杀伤活性，并与浓度成正比。通过提高HL-60细胞表面MICA的表达水平，可能有助于提高刺激NK细胞杀伤活性的激活性信号水平，促进MICA与NK细胞NKG2D受体结合，增强NK细胞的杀伤活性，有利于启动免疫反应，对清除微小残留病灶及减少白血病复发具有非常重要的意义。 　　【关键词】枸杞多糖；白血病细胞株HL-60； NK细胞；MICA ；白血病；杀伤活性 　　 急性白血病（AL）是造血干细胞的恶性克隆性疾病，目前治疗包括传统的化疗、放疗、造血干细胞移植及新兴的分子靶向治疗和免疫治疗。各种方法因其有不同的局限性在临床上受到限制。近年来，免疫治疗已经成为白血病尤其是对微小残留病灶清除的研究热点，并取得了一定成功。 　　 NK细胞是机体固有免疫的主要细胞，在肿瘤免疫中构成了第一道防线，N K细胞对靶细胞的杀伤活性与其细胞表面的受体和靶细胞表面的配体密切相关。??［1］?NK细胞对HL-60细胞具有一定的杀伤活性，但杀伤活性不高，需要大量的NK细胞才能达到治疗要求。而目前体外大量扩增NK细胞的技术还处于实验阶段。如何激活NK细胞活性并扩大其群体是研究NK细胞的重要问题。研究表明MICA表达阳性的肿瘤细胞对NK细胞的杀伤敏感性明显高于MICA阴性者。??［2］?因此，NKG2D结合MICA可介导NK细胞的杀伤活性。中药在抗肿瘤方面显示出了明显的优势，某些多糖成分（云芝多糖，灵芝多糖等）可通过激活NK细胞达到抗肿瘤作用。枸杞多糖(LBP)是传统中药材枸杞的主要成分之一，有增强机体免疫力，抗肿瘤等作用。有关枸杞体外抗瘤作用的报道较少，据此，本实验以枸杞多糖体外调节NK细胞为研究，观察枸杞多糖能否上调人白血病细胞株HL-60表面MICA的表达率,是否能增强NK细胞的杀伤活性，进而探讨NK细胞对白血病免疫治疗的新途径。 　　1 材料 　　1.1 培养液和试剂：RPMI-1640（Gibco公司）,胎牛血清（杭州四季青公司）,NK细胞 (兰州大学医学实验中心)， HL-60 (兰州大学医学实验中心)，枸杞多糖(咸阳瑞欣生物技术有限公司)，人组织相容性复合体1类相关基因A（MICA）酶联免疫分析试剂盒（RD公司）,噻唑兰（MTT）（科昊生物工程有限责任公司）。 　　 　　1.2 细胞培养:NK细胞接种在含10%胎牛血清的RPMI1640完全培养基中，置于37℃，5%CO2的培养箱中培养，每4～5d进行换液，传代培养；HL-60细胞培养于含10 ％的胎牛血清RPMI1640完全培养基中，置于37℃，5%CO2 培养箱中培养，每3d进行换液，传代培养，8代以内用于实验。 　　2 实验方法 　　2.1 方法：（1）ELISA检测不同浓度的枸杞多糖作用前后HL-60细胞培养上清中MICA的浓度 　　 收集HL-60细胞，低速（600r/min）离心5mi