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深黄被孢霉发酵对大豆油脂含量及成分影响 　　摘要：以粉碎的大豆为发酵底物，用深黄被孢霉进行液态发酵，通过检测发酵过程中菌丝的形态、提油量的变化和油脂成分，以探寻有助于提高大豆出油总量的方法。研究结果表明，深黄被孢霉在以大豆为发酵底物的条件下，能观察到菌丝中有油脂的积累，并且大豆在经深黄被孢霉发酵144 h后油脂提取量最大，在提取时间3 h的情况下，油脂提取率达到了89.39%，与相同培养、提油条件下没有经过微生物发酵的油脂比较，提取量提高了31.79%，经过深黄被孢霉发酵后的大豆油脂多不饱和脂肪酸含量比未经过发酵的大豆油增加了9%。 　　关键词：大豆；深黄被孢霉；液态发酵；油脂提取率；脂肪酸成分 　　中图分类号： TS225.1+3文献标志码： A文章编号：1002-1302（2015）02-0269-02 　　收稿日期：2014-11-05 　　基金项目：贵州省科学技术基金（编号：黔科合J字[2011]32号）。 　　作者简介：牛晓娟（1983―），女，黑龙江大庆人，硕士，讲师，主要从事应用微生物的研究。Tel：（0851）6702541；E-mail：252984899@。 　　通信作者：邱树毅，博士，教授，主要从事应用微生物、化学工程、食品工程的研究。E-mail：syqiu@。油料作物的常规提油方法主要是机械压榨和有机溶剂浸出法，不能有效地分解细胞壁和破坏油脂蛋白质体，导致提油后饼粕中残留较多的油脂，油脂提油率不高。研究表明，在提取的过程中加入能够破坏细胞壁和油脂体的酶[1-2]，将有助于在较短的时间里提高油料种子的提油率。Shah等采用三相分离的方法应用于麻疯树籽油脂的提取，在三相分离提取前用一种叫做Protizyme的混合酶进行预处理，在超声波振动下仅仅2 h，出油率就达到98%[3]。Sharma等将含酸性、中性、碱性蛋白酶的混合酶加入到花生种籽中，在设定条件下保温18 h，花生油提取率达到了92%[4]。本研究利用产油微生物可能产生的酶类代替现成的工业酶制剂的部分作用（破坏细胞壁或者分解蛋白质、糖类等），不仅可以使油料作物本身出油率提高，产油微生物还可以利用油料作物本身的碳水化合物产生微生物油脂，两者油脂累加可提高出油率，把生物发酵法更好地应用于油脂提取，可以大大节省油脂提取的成本。 　　1材料与方法 　　1.1材料 　　大豆购自贵阳市煤矿村市场。 　　1.2菌种 　　深黄被孢霉（Mortierella isabellina，AS 3.3410），购自中国科学院微生物研究所，使用前先进行活化。 　　1.3培养基 　　1.3.1菌种保藏培养基PDA培养基：马铃薯浸取液 1.0 L，葡萄糖20.0 g，KH2PO4 3.0 g，MgSO4?7H2O 1.5 g，维生素B1微量，琼脂15.0 g，pH值6.0，1×105 Pa灭菌30 min。 　　1.3.2种子培养基深黄被孢霉种子培养液：马铃薯浸取液1.0 L，葡萄糖20.0 g，KH2PO4 3.0 g，MgSO4?7H2O 1.5 g，pH 值6.0。 　　1.3.3发酵培养基大豆发酵培养基：粉碎过的大豆10 g，自来水100 mL，pH值自然。 　　1.4试验方法 　　挑取保存于斜面的少量菌丝，于PDA斜面培养基上 28 ℃ 培养3 d，直至长出大量孢子。用无菌水冲洗斜面上的孢子，并用移液枪吸取500 μL接入100 mL的液体种子培养基中，于28 ℃、180 r/min振荡培养24 h。然后将种子液按1%的比例接种到装有发酵培养基的250 mL三角瓶中，三角瓶装液量均为100 mL，于28 ℃、180 r/min振荡培养144 h。每隔24 h取样进行油脂提取。 　　1.4.1粗脂肪的测定以乙醚作溶剂，采用索氏提取的方法对烘干过的样品进行油脂提取，一般认为索氏提取8 h可以把样品中的油脂提取完全[5]，即为油料作物的总脂肪含量。本试验把培养条件相同但未接种深黄被孢霉、油脂提取时间为3 h作为对照。 　　计算公式： 　　粗脂肪含量=m2-m1m×100%。 　　式中：m1为抽提瓶质量（g），m2为索氏抽提后抽提瓶和油脂总质量（g），m为样品的质量（g）。 　　1.4.2脂肪酸成分分析日本岛津GC-2014型气相色谱仪配以FID检测器和聚乙二醇（PEG）毛细管色谱柱（30 m×0.53 mm×0.53 μm）。气体流量：以高纯氮作为载气，FID检测器的氢气和空气流量比为50 ∶50 kPa，流速为 1.5 mL/min；柱温：180 ℃ 保温2 min后，以5 ℃/min升温至 230 ℃，在230 ℃ 保持15 min；温度条件：进样口温度250 ℃，检测器温度280 ℃；进样量为1 μL；分流比为20 ∶1；