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猪细小病毒病诊断及防治措施 　　摘要：从临床症状、病理变化、诊断方法等多方面详细介绍了猪细小病毒病的发病特点、诊断和预防措施，旨在引起兽医工作者对该病的重视，同时也为猪场诊断、预防该病提供理论基础。 　　关键词：猪细小病毒；临床症状；诊断方法；防制措施 　　中图分类号：S858.28 文献标识码：B 文章编号：1007-273X（2014）12-0019-02 　　猪细小病毒病是由细小病毒（PPV）引起的猪传染病，广泛存在于猪群中，感染率高，一些养殖户仔猪出生后死亡的现象越来越突出，造成很大经济损失。2014年7月，韶关市某猪场发现以1～2胎为主的新母猪发病，表现为分娩延迟，产死胎、木乃伊胎，有部分健康活仔，窝产仔数偏少，母猪均表现正常，发病率100%。笔者经临床检查、解剖观察、实验室检验等方法确诊为猪细小病毒病，现将该病的诊疗情况进行报告，并结合实际经验，对猪细小病毒病的防治措施进行介绍。 　　1 临床症状 　　1.1 母畜生殖障碍 　　PPV感染的主要临床症状是母畜生殖障碍，表现为头胎或经产母猪产出大部分死胎、木乃伊胎、畸形胎及正常胎儿，或产少数不久即死的虚弱仔猪。 　　1.2 生殖临床症状 　　生殖临床症状与发生感染的妊娠阶段有关。妊娠母猪特别是头胎的妊娠母猪如感染该病，在其全部妊娠期内均可发生流产。当妊娠早期（6～35 d）受到感染时，胎儿死亡率可高达80%～100%，母猪迅速吸收死亡胎儿，导致不孕和重复发情[1]；母猪在妊娠中期（35～70 d）感染病毒后，常形成不同程度的木乃伊胎儿，在分娩时排出；母猪在妊娠中期（70～114 d）感染病毒后，因胎儿自身免疫反应而抵御病毒得以存活，但长期带毒[2]。一般来讲，母猪在免疫中后期感染病毒后死产发生率10%[3]。公猪感染后，受精率或性欲没有明显的影响，但成为长期带毒者。 　　2 病理变化 　　2.1 母猪 　　母猪流产时，肉眼可见子宫内膜有轻微炎症，胎盘部分钙化，胎儿在子宫内死亡后被软组织吸收。组织学病变为母猪的妊娠黄体萎缩，子宫上皮组织和固有层有局灶性和弥散性单核细胞浸润。感染胎儿死后可见多种组织和器官有范围广泛的细胞坏死、炎症和核内包涵体[4]。 　　2.2 胎儿及仔猪 　　大多数死胎、死仔或弱仔可见皮下充血或水肿、出血、体腔积有淡红或淡黄色渗出液、脱水等；肝、脾、肾有时肿大、脆弱或萎缩；个别死胎、死仔皮肤出血，弱仔生后半小时先在耳尖，后在颈、胸、腹部及四肢上端内侧出现淤血、出血斑，半天内皮肤变紫而死亡。组织学检查，可见死胎或死仔大脑灰质、白质和软脑膜有以增生的外膜细胞、组织细胞和浆细胞形成的血管套为特征的脑膜脑炎变化，一般认为是猪细小病毒感染的特征性病变[5]。 　　3 实验室检验 　　根据流行病学临床症状和病理变化可做出初步诊断，确诊需进一步做实验室诊断。 　　3.1 细菌培养 　　无菌采集病死猪的淋巴结、肺、肝、脾等病料，将病料接种于麦康凯血琼脂平板、巧克力琼脂平板及肉汤培养基中，37℃恒温培养48 h，未见致病菌生长。 　　3.2 病原分离 　　取流产胎儿、死亡仔猪的脑、肺脏、肾等病料经研磨、稀释、过滤处理后接种PK-15细胞系或者ST细胞系，然后再37℃ 5% CO2条件下培养，进行病毒分离。 　　3.3 病原鉴定 　　3.3.1 PPV荧光抗体染色 通过免疫荧光技术观察胎儿组织的病毒抗原是诊断PPV的最好方法[6]。该方法可直接镜检组织冰冻切片。取疑似病猪的扁桃体或者母猪产出的死胎、木乃伊胎，然后将各种组织做冰冻切片，用荧光抗体诊断液染色待检PPV标本片，将染色标本片置湿盒中，放入37℃培养箱作用30 min。取出用PBS液（pH 7.2～7.6）冲洗和漂洗15 min（中间换液1次），再用去离子水冲洗除盐，放置标本片让其自然干燥，然后滴加磷酸甘油，盖上洁净的盖玻片，放于荧光显微镜下观察。若发现细胞内有亮绿色荧光颗粒集结，而对照无现象，则可判定有 PPV 抗原。 　　3.3.2 PPV酶标抗体直接染色法 在普通生物显微镜下观察染色情况，若未接种PPV的正常对照细胞片中细胞核无棕色着染现象，而接种的PPV的细胞片中细胞核着染，即可确诊。 　　3.2.3 普通RT-PCR方法检测 根据PPV的基因序列，设计、合成特异性引物，采用普通RT-PCR方法检测死亡胎儿、仔猪相关组织病料内的PPV，若显示阳性即说明感染该病毒。 　　3.3.4 血凝试验（HA） 在96微孔板中进行，自左至右每孔中预先加入50 μL生理盐水（或者PBS溶液），然后取病毒原液或者收获液（将出现病变的细胞培养物反复冻融3次，2 000 r/min离心10 min，除去细胞碎片，收获病毒液）。自左至右按1∶2、1∶4、1∶2n作倍比稀释，每孔加