瘦素对小鼠细胞因子分泌及脾淋巴细胞增殖状况影响.docVIP

瘦素对小鼠细胞因子分泌及脾淋巴细胞增殖状况影响 　　【中图分类号】 R69 【文献标识码】 A 【文章编号】1185-1672(2007)-04-0308-03 　　摘要 目的 探讨高Leptin水平在不同免疫状态下对小鼠细胞因子分泌及脾淋巴细胞增殖状况的影响。方法 选用8周龄的清洁级BALB/c雄性小鼠共40只，分成五组，分别用外源性鼠Leptin和Leptin抗体人为形成小鼠的不同Leptin水平状态，并利用环孢素（CsA）将小鼠分为正常免疫和免疫抑制状态两类，两种状态各设对照组，测定脾淋巴细胞增殖情况，用ELISA方法检测外周血中IL-2、IL-4、IFN-γ和Leptin的浓度。结果 正常免疫状态下，Leptin组的脾细胞增殖与对照组无差异，细胞因子除IFN-γ升高外,IL-2、IL-4均无差异； Leptin抗体组显示脾细胞增殖能力下降，各细胞因子测定显示差异；免疫抑制状态下，Leptin组的IL-2、IFN-γ水平上升 、IL-4分泌降低，这种结果也在几乎所有体外加入Leptin的各组中出现。结论Leptin可以起免疫调节作用，增加IFN-γ、IL-2的合成，降低IL-4的产生，使免疫应答向Th1细胞方向偏离。在正常免疫状态下，Leptin的免疫调节作用不明显，而在免疫抑制情况下，这种调节作用可以得到体现。 　　关键词 瘦素；免疫；细胞增殖；细胞因子 　　Leptin，亦称瘦素，主要由白色脂肪组织产生并释放入血，是由肥胖（ob）基因编码合成的一种多肽类激素，1994年Zhang［1］等首次成功克隆了小鼠的ob基因及其人类的同源序列，其对免疫系统的作用是近年来研究的一个重要成果，虽然这方面的研究报道不是很多，但重要性不言而喻。本实验研究Leptin对小鼠外周血淋巴细胞、脾淋巴细胞及较具有代表性的细胞因子IL-2、IL-4、IFN-γ的作用，旨在认识Leptin对外周成熟T细胞的作用，有助进一步了解Leptin对细胞免疫的影响。 　　 　　1 材料与方法 　　1.1 动物及其分组处理 选用8周龄重20g的雄性清洁级BALB/c小鼠40只，应用抽签法，随机分成五组，每组8只。A组：(B、C组的对照组)注射PBS（磷酸盐缓冲液）；B组：注射小鼠Leptin (2.0 mg/kg/d )；C组：注射小鼠Leptin抗体(0.2 mg/kg/d )；D组：(E组的对照组)注射CsA（环孢素）(2.0mg/kg/d )；E组：注射CsA+Leptin (CsA为2.0mg/kg/d, Leptin为2.0mg/kg/d )。7d后处死。所有小鼠作腹腔注射, 1 d分2次。 　　1.2 主要试剂 IL-2、IL-4、IFN-γ的ELISA试剂盒(RD Systems公司)、重组小鼠Leptin (RD Systems公司)，使用前稀盐酸激活溶解后，再用NaOH中和至pH为5.2。 　　1.3 细胞分离 　　1.3.1 外周血淋巴细胞分离 取A、B、C三组小鼠全血(EDTA抗凝)部份分离血浆待测细胞因子；另外，按常规用淋巴细胞分离液分离制备单个核细胞悬液，并调整细胞浓度为1×106/ml供检测。 　　1.3.2 脾淋巴细胞悬液制备 取A、B、C、D、E五组小鼠脾脏按常规制备细胞悬液并调整细胞浓度为1×106/ml待测。 　　1.4 脾淋巴细胞增殖试验 采用常规的3H-TdR掺入法(细胞终浓度为5×105/ml)，所用刺激剂(ConA的终浓度2.5μg/ml)，用液闪测定仪测定细胞增殖cpm值，最终数值取3个复本的中位数。 　　1.5 细胞因子的测定 待测样品为A、B、C组小鼠血浆，D、E组小鼠血清，测定项目包括IL-2、IL-4、IFN-γ，均用相应的ELISA试剂盒，检测步骤均按相应的说明书。 　　1.6 统计学方法 用独立样本均数t检验，配对样本t检验，以及单因子方差分析one way ANOVA，并SNK(Student-Neuman-Keul)、LSD (Least-significant difference )在均值间作成对比较。统计函数计算用SPSS11.5统计软件运算。 　　 　　2 结果 　　2.1 脾淋巴细胞增殖 五组的脾淋巴细胞增殖情况见表1。A、B、C三组单独脾细胞增殖数据经统计学处理存在显著性差异；其中A组与B组未见显著差异；而A组与C组比较有极显著差异, C组增殖反应弱于A组；D组与E组有极显著差异，E组(用Leptin+CsA)增殖反应强于D组(单用CsA)。各组加Leptin与未加Leptin比较,除了在体内已经注射过Leptin的B、E两组没有显著性差异外,其余均有显著差异，脾细胞增殖反应均增强。 　　2.2 细胞因子测定 　　2.2.1 外周血细胞因子测定