鬼臼毒素二元醇质体体外抗宫颈HPV感染研究.docVIP

鬼臼毒素二元醇质体体外抗宫颈HPV感染研究 　　【摘要】 目的 研究鬼臼毒素二元醇?|体（POD-BE）体外抗宫颈人乳头瘤病毒（HPV）感染的效果。方法 采用超声注入法制备POD-BE， 采用透析法测定POD-BE包封率（EE%） ， 观察POD-BE形态学、外观性状及稳定性， 运用CCK-8法和流式细胞术（FCM）分别检测POD-BE和POD处理后永生化人宫颈上皮细胞（H8细胞）的增殖和凋亡， 以透射电镜和激光共聚焦显微镜 （LCSM）分别观察细胞的形态变化及药物在细胞的分布。结果 制备的POD-BE混悬液电镜下为类球状小囊泡， 平均粒径（84.6±9.2）nm， Zeta电位（-27.2±4.2）mV。保存在4℃冰箱内的POD-BE样本， 6个月内仍保持半透明、质地均匀外观， 未见沉淀及药物结晶析出。3000 r/min离心20 min未发现分层现象。而保存在室温下的样本， 24 h未见任何变化， 3～6个月时出现少许混浊， 震荡后样本恢复均一外观， 未见药物结晶析出。POD-BE组和POD组均呈剂量和时间依赖性地抑制H8细胞的增殖。在相同浓度同一时间条件下， POD-BE组对H8细胞的增殖抑制效果明显强于POD组（P0.01）。POD-BE组 12、24、48 h的半数抑制浓度（IC50）分别为782、595、97 μg/L， 而POD组的IC50则分别为1966、1570、758 μg/L；空白BE组对细胞无明显毒性。与空白对照组相比， POD-BE组和POD组均能明显诱导H8细胞凋亡（P0.01）；然而POD-BE组诱导凋亡的效果则显著强于POD组（P0.01）。10 μg/L的POD-BE和POD分别处理H8细胞24 h后， 透射电镜下显示： H8细胞被药物处理后其染色质高度凝聚、边缘化， 形成凋亡小体。H8细胞分别被POD-BE和POD处理24 h后， 两组的荧光均表现出聚集于细胞核的趋势， 且POD-BE组较POD组荧光信号强度显著增强， 而空白BE组和空白对照组未见有阳性荧光信号表达。结论 POD-BE具备理想的理化性质， POD-BE较POD对H8细胞具有更强的增殖抑制和凋亡诱导效果。 　　【关键词】 鬼臼毒素；二元醇质体； 细胞凋亡； 宫颈人乳头瘤病毒 　　DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2017.01.001 　　Research of podophyllotoxin binary ethosomes in external anti-cervical HPV infection ZHONG Shu-bin， WANG Xiao-jie， CHEN Ru-da， et al. Department of Dermatology， Nanhai Affiliated Hospital of Southern Medical University， Guangzhou 510515， China 　　【Abstract】 Objective To research effect by podophyllotoxin binary ethosomes （POD-BE） in external anti-cervical human papilloma virus （HPV） infection. Methods POD-BE was prepared by ultrasonic injection method， and encapsulation efficiency （EE%） of POD-BE was detected by dialysis method. Observation was made on morphology， external properties and stability of POD-BE. CCK-8 method and flow cytometry method （FCM） were applied to detect POD-BE and multiplication and apoptosis of immortalized human cervical epithelial cell （H8 cell） after POD treatment. Transmission electron microscope and laser scanning confocal microscope （LCSM） were applied to respectively observe morphologic change and drug distribution of cell. Results Prepared POD-BE sus