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黎药海南野扇花药效学研究 　　【摘要】目的：探讨海南野扇花对免疫功能，止血功能的影响。方法：将小鼠分为海南野扇花给药高（13g/kg）、中（65g/kg）、低（33g/kg）剂量组及阴性（生理盐水）、阳性（云南白药）对照组，采用半数溶血试验（HC50）；鸡红细胞吞噬实验；凝血试验考察药物的药效学作用。结果：海南野扇花高，中剂量均能显著提升（P001，P005）小鼠血清溶血素含量；显著增加（P001）小鼠巨噬细胞吞噬功能；凝血试验的高、中剂量均显著缩短（P001）小鼠凝血时间。结论：海南野扇花作为一种活血化瘀，消炎止血的药物，具有良好的生物学活性。 　　【关键词】黎药；海南野扇花；免疫功能；止血 　　【中图分类号】R29【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517（2017）05-0046-03 　　黎族在海南具有3000多年的生活史[1]，为了生存和繁衍，黎族人依托海南独特的热带资源气候，逐渐探索和实践出了丰富的具有民族特色医药知识[2]。海南野扇花（Sarcococca vagans Stapf）为黄杨科野扇花属植物，主要分布于我国海南、云南、广西等地区[3]。报道集中于海南野扇花的化学成分研究，未见药理药效方面研究。海南民间用以活血化瘀，消炎止痛，常用于跌打损伤后的止血及瘀血祛除，以及咽喉肿痛、风热感冒的消炎止痛。研究参考黎族民间常用用法，考虑其具有止血、提升巨噬细胞吞噬血块的能力，同时可能具有提高免疫力，增强抵抗力的作用。故设计免疫力功能试验及止血试验，为今后开发新药提供一定的研究数据。 　　1仪器与材料 　　11实验动物KM小鼠，体重18～22g，雌雄各半，由海南省实验动物中心提供，许可证号SCXK（琼）2015-0007；动物饲养于海南省药物研究所SPF动物房，使用许可证号：SYXK（??）2014-0025。 　　12药物海南野扇花由五指山海南黎族民间医药研究协会提供，经海南省药物研究所鉴定；云南白药（批号：ZBA1505，云南白药集团股份有限公司）。 　　13仪器二氧化碳培养箱、十万分之一天平、离心机、紫外分光光度计、显微镜、手术器械。 　　14试剂Hank′s液Biohao Biotechnology CoLtd）；PBS缓冲液（批号Biohao）；SRBC（批号鸿泉生物）；SA缓冲液（批号Biohao）；瑞姬氏染液（批号：上海源叶生物科技）；都氏试剂（批号：D5941-6VL，SIGMA）。 　　2方法 　　21分组与给药海南野扇花的推荐剂量为成人（体重70kg）每日50g生药量，依据体重换算系数[4]，20g标准小鼠等效剂量为170×00026=013g，即等效小鼠剂量65g/kg，设置为给药中剂量组，高低剂量组分别为等效剂量2倍和05倍，即高、中、低剂量组分别为每日13、65、33g/kg。 　　将海南野扇花干品粉碎，取130g药材粉加8倍量纯化水浸泡2h，大火煎煮30min，过滤收集滤液，剩余药材再加8倍量水重复煎煮，合并滤液，浓缩至100mL（含生药13g/mL）用于高剂量组。中剂量及低剂量给药组分别为高剂量给药组稀释2倍及4倍。小鼠按每10g体重给药01mL给药，每日一次。 　　阳性对照组：云南白药胶囊，用纯化水配置为00026g/mL溶液，小鼠按每10g体重给药01mL，1次/d。阴性对照组：等量纯化水，每日按10g体重给药01mL。 　　22血清溶血素测定试验[5]随机取KM小鼠40只，分为给药高、中、低剂量组及阴性对照组，每组10只，雌雄各半。每日按每10g体重给药01mL，连续给药30d，采用半数溶血值（HC50）的测定方法进行实验。结束前4d以2%（v/v）浓度的绵羊血红细胞（SRBC）免疫小鼠，4d后，小鼠采血分离血清，用SA缓冲溶液稀释200倍，取稀释后血清1mL放入试管内，加入10% SRBC 05mL和1∶8稀释的豚鼠血清补体1mL。另设置不加血清的对照管。置于37℃恒温水浴箱内水浴30min，立即冰浴终止反应，离心，取上清液1mL，加入3mL都氏试剂，同时取10%SRBC 025mL，加都氏试剂至4mL，充分混匀，作为SRBC半数溶血管。静置约10min，分光光度计于540nm处测OD值。HC50依下式计算。 　　HC50=样品光密度值SBBC半数溶血时的光密度值×100% 　　23巨噬细胞吞噬功能测定试验[5]随机取KM小鼠40只，分为给药高、中、低剂量组及阴性对照组，每组10只，雌雄各半。每日按每10g体重给药01mL，连续给药30d，采用小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡血红细胞（半体内法）进行实验，鼠腹腔注射20%鸡红细胞悬浊液1mL，放置30min，脱颈处死小鼠，剪