第12章+核酸生物合成课件.pptVIP

复制（放射性dRNA终止符）＋荧光测序 3.3 天然重组与基因重组 天然重组包括同源、异源重组 同源重组—父母DNA重组减数分裂 真核生物，重组发生在减数分裂期同源染色体的非姊妹染色单体间，细菌可发生在转化或转导过程中，通常称这类重组为同源重组(homologous recombination)，即只要两条DNA序列相同或接近，重组可在此序列的任何一点发生。 溶原细菌 异源重组 应用 基因重组——不同来源的DNA按人的设计和干预下定向拼接、组合。 特殊基因（多肽激素、抗生素、酶、药物蛋白） 重组入 蛋白产品 工程菌（如大肠杆菌） 特殊基因 超级细菌 如 超级除油菌 超级植物 “侏罗纪公园” 中的恐龙 抗病虫、抗旱、带颜色等等 基因治疗、基因武器 重组入 如何实现重组呢？ 目的基因连接在载体上植入，常用载体有质粒和病毒。 细菌染色体 质粒 易于分离、测序，天然可转移，不被轻易降解，常作为重组的载体 过程举例——超级细菌 都是DNA 重组质粒 DNA 限制性核酸 内切酶处理 有的片段中具有目的基因 载体质粒 环状 DNA 限制性核酸 内切酶处理 DNA 连接酶催 化两类 DNA 片 段 拼接 植入受体 受体细菌 筛选出重组细菌 ？ 带有粘性末端的 DNA 片段 各种细菌 完整的细菌染色体或已分纯的含基因DNA扩增片段 注射法(动植物常用) 开门法 （如电击、超声、化学药剂） 病毒法(动植物常用) 1um 重组基因片段 基因枪 黄金子弹 靶细胞 基因枪法 ——动植物细胞基因重组 在特殊培养基上（如含有青霉素）筛选目的细菌 质粒上具有抗性基因 如抵抗青霉素 长出必然是重组成功的细菌 筛选 进一步筛选性能优化的细菌 第四节 RNA的生物合成 转录——以DNA为模板，按碱基配对原则（dA-U、dT-A、dG-C、dC-G)合成RNA链。 4.1过程 DNA 复制 RNA 转录 ★ 两条链都是模板链吗？ 不是 第十二章 核酸的生物合成 ——生命的起点 遗传中心法则 DNA复制 RNA复制 转录 逆转录 翻译 DNA的复制（以DNA为模板合成DNA）★ RNA的转录（以DNA为模板合成RNA）★ RNA的逆转录（以RNA为模板合成DNA） RNA的复制（以RNA为模板合成RNA） 人体体细胞23对染色体 各有一半来自于父母 核酸——DNA、RNA 提问：二者区别 ？ 碱基（A、G、C、T——A、G、C、U） 戊糖（脱氧核糖——核糖） 第一节 DNA的生物合成 机制——半保留复制 1 2 保留了一半父代DNA成份 父代DNA 半保留复制 子代DNA 1）旋转酶解开超螺旋。 1.1过程 旋转酶 ★ 2）解螺旋酶在起点双向打开螺旋 复制起始处的DNA片段 起点 复制叉 解螺旋酶——解开双链 解螺旋酶 3）DNA结合蛋白与单链结合并向前移动 DNA结合蛋白 起点 提问：DNA结合蛋白的作用？ A T G C 防止单链复合 起点 A T C C A T T 小段RNA引物 U 磷酸核糖 RNA聚合酶 4）RNA聚合酶催化起点处通过碱基互补连接引物RNA链。 作用——确定起始部位，引导复制开始。 3`OH 5`PiPiPi 3`OH 5`PiPiPi 3`OH 5`PiPiPi 为什么不能直接连接DNA？ A—U G—C 6）新链5`→3`延长（复制DNA） 5）引物3`连接dXTP（ dATP / dTTP / dGTP / dCTP ） 开链方向 起点 新链5｀ 新链3｀ 新链3｀ 新链5｀ ？ ？ 父代DNA—两链方向相反 ！ 必然无法连续复制 开链方向 7）均以5｀→3｀方向形成前导链和滞后链 由冈崎片段连接成的新DNA链称滞后链。 与复制叉移动方向相同，可以一直复制到底的新DNA链称前导链。 冈崎片段：即先按照5‘→3’方向（与复制叉移动方向相反）合成的若干DNA片段。（1968，冈崎） 5` 3` 5` 8）切除引物，补缺。 3` 3` 3` 3` 3` 3` 3` 3` 3` 3` 3` 3` 3` 3` 3` 3` 3` 3` 3` 3` DNA聚合酶3`→5`核酸外切 （精确配对） 连接酶 连接酶连接缺口