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食品中阪崎肠杆菌能力验证结果分析和探讨 　　摘要：指出了为提升实验室食品中阪崎肠杆菌检测能力，增强实验室竞争能力，实验参与了食药总局组织的阪崎肠杆菌检测能力验证活动。利用BAX Q7对能力验证中的10个样品进行了快速筛查，根据GB 4789.40-2010《食品安全国家标准 食品微生物学检验 阪崎肠杆菌检验》，对疑似菌进行了鉴定。结果显示：编号CODE 2、CODE 6、CODE 9样品检出阪崎肠杆菌，其余7个样品均未检出阪崎肠杆菌。实验室顺利完成能力验证，结果为满意。 　　关键词：能力验证；阪崎肠杆菌；自动病源微生物检测系统 　　中图分类号：TS252.7 　　文献标识码：A文章编号2017 　　1引言 　　阪崎肠杆菌（又称阪崎氏肠杆菌）是肠杆菌科的一种。它能引起严重的新生儿脑膜炎、小肠结肠炎和菌血症，死亡率高达50% 以上。目前，微生物学家尚不清楚阪崎肠杆菌的污染来源，但许多病例报告表明婴儿配方粉是目前发现的主要感染渠道。所以加强婴儿配方粉中的阪崎肠杆菌检验十分有必要，笔者所在的实验室参加了中国食药总局组织的食品安全抽检监测承检机构微生物检验盲样考核。 　　对于实验室而言，能力?证是利用实验室间比对来判定实验室能力的活动。中国合格评定国家认可委员会（CNAS）利用能力验证结果评价实验室的技术能力，作为与现场评审构成互为补充的能力评价的重要方式。能力验证结果是CNAS判定申请认可和获准认可实验室是否维持其技术能力的重要依据之一＼[1＼]。 　　BAX Q7以DNA 为基础用于病原微生物检测和食品质量控制，使用实时荧光定量PCR 技术检测病原微生物，采用杜邦开发的高特异性引物，目标病原微生物独特的基因信号可以快速被检测。 　　2实验部分 　　2.1检验依据 　　GB 4789.40-2010《食品安全国家标准 食品微生物学检验 阪崎肠杆菌检验》＼[2＼]和食药总局能力验证作业指导书。 　　2.2仪器和试剂 　　仪器：电热恒温培养箱（上海精宏实验设备有限公司）；高压灭菌锅（日本RAYAMAHI）；电子天平（上海舜宇恒平科学仪器有限公司）；均质器（天津市恒奥科技发展有限公司）；超纯水机（美国Millipore）；数显恒温水浴锅（金坛市荣华仪器制造有限公司）；BAX Q7（美国 DUPONT）。 　　试剂：缓冲蛋白胨水（BPW）、改良月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤-万古霉素（mLST-Vm）、阪崎肠杆菌显色培养基、胰蛋白胨大豆琼脂（TSA）、生化鉴定试剂盒均购自广州环凯微生物科技有限公司。BAX Q7试剂盒购自DUPONT。 　　2.3样品 　　样品：阪崎肠杆菌能力验证样品共10瓶，瓶号为CODE 1～10。共10袋奶粉样品，编号为CODE1～10。每个相同编号的阪崎肠杆菌样品和奶粉样品作为1件样品进行检测。样品由中国食品药品检定研究院提供。 　　2.4检测过程 　　2.4.1前增菌和增菌 　　根据组织方作业指导书要求，样品前处理按照作业指导书进行，在生物安全柜内将阪崎肠杆菌样品的西林瓶打开，取900mL灭菌BPW增菌液加入到无菌均质袋中，并将西林瓶内小球加入到BPW增菌液中，充分溶解。然后再将与西林瓶相同编码的奶粉样品加入到上述BPW增菌液中，充分匀质混匀。依此方法，分别对10件样品进行处理。同时按照GB 4789.40-2010《食品安全国家标准 食品微生物学检验 阪崎肠杆菌检验》做阳性对照实验。上述增菌液36℃培养18 h。用培养过后的增菌液上BAX Q7初筛，系统内部质控峰会在75～80 ℃之间出现一个峰值证明实验有效，阪崎肠杆菌则会在85～90 ℃之间出现峰值，峰值越大，说明样品阳性越强。仪器系统界面显示CODE 2、CODE 6、CODE 9为阳性，其余样品为阴性。结果见图1～11。从增菌液中移取1 mL转种于10 mL改良月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤-万古霉素（mLST-Vm），44 ℃培养24 h。 　　2.4.2分离 　　轻轻混匀mLST-Vm肉汤培养物，各取增菌培养物1环，分别划线接种于两个阪崎肠杆菌显色培养基平板，36℃培养24 h。结果见表1。挑取1～5个可疑菌落，划线接种于TSA平板。25 ℃培养48 h。 　　2.4.3鉴定 　　自TSA平板上直接挑取黄色可疑菌落，进行生化鉴定。结果见表2。 　　3结果 　　通过以上实验得到编号CODE 2、CODE 6、CODE 9样品检出阪崎肠杆菌，其余7个样品均未检出阪崎肠杆菌。 　　4讨论 　　能力验证结果可用于实验室内部质量管理、检测人员的技术能力考核、建立新的检测方法、检测仪器设备的验证和核查、有助于提高实验室技术能力。同时参加能力验证也有助于提升客户对实验室出具准确可靠的检测