当归挥发油给药大鼠尿液比较代谢组学的研究.docVIP

当归挥发油给药大鼠尿液比较代谢组学的研究 　　[摘要] 为了分析当归挥发油（Angelica sinensis volatile oil， ASVO）对正常大鼠尿液代谢产物的影响，揭示ASVO影响大鼠体内代谢的可能途径。该实验将50只雄性Wister大鼠随机分成空白对照组、ASVO高（0.352 mL·kg-1）、中（0.176 mL·kg-1）、低剂量（0.088 mL·kg-1）组和阿司匹林（aspirin， ASP）对照组，每组10只，分别给予生理盐水和高、中、低剂量的ASVO及ASP各0.2 mL，连续给药3 d，并利用大鼠代谢笼收集各组大鼠12，24，36，48 h的尿液，应用GC-MS检测不同时段的大鼠尿液代谢指纹图谱，采用主成分分析（principal component analysis， PCA）方法和正交偏最小二乘分析方法（orthogonal partial least-squares discriminant analysis， OPLS-DA）分析，通过变量重要性投影（vriable importance in the projection， VIP）和T检验筛选潜在生物标志物。结果显示，ASVO中剂量组在36 h时对大鼠尿液代谢物影响最大。与空白对照组相比，ASP组与ASVO给药组大鼠尿液中7种代谢物有显著变化（P0.05），其中乌头酸、琥珀酸、柠檬酸、α-酮戊二酸、甘氨酸、苹果酸的含量呈升高趋势（P0.05），前列腺素含量呈下降状态（P0.01），认为ASVO与ASP的作用机制具有相似性。它们对体内代谢的影响可能主要集中于能量代谢、氨基酸代谢以及脂质代谢途径。大鼠灌胃ASVO后可提高机体的能量代谢，抑制炎性物质的产生、增强机体的免疫能力，该结果为进一步阐释ASVO药理作用提供了依据。 　　[关键词] 当归挥发油；代谢组学；GC-MS；潜在生物标志物 　　当归为伞形科植物当归Angelica sinensis Oliv.Diels的干燥根，多年生草本植物[1]，主产于甘肃岷县、漳县、渭源等地，是甘肃的道地药材之一。其中当归挥发油（A. sinensis volatile oil， ASVO）是当归的主要成分之一，研究发现当归挥发油主要化学成分为Z-藳本内酯78.61%， Z-丁烯基酞内酯7.99%， E-藳本内酯1.66%，E-丁烯基酞内酯1.29%等[2]；ASVO在临床上已广泛应用于镇痛抗炎、平喘、增加机体能量和增强机体免疫功能等。近代研究中代谢组学已广泛应用于中药成分及中药作用机制的研究[3-4]，固本研究采用代谢组学技术[5-7]，分析阿司匹林（aspirin， ASP）和ASVO给药组与空白对照组大鼠尿样，并比较给药组内源性代谢产物的变化，以期阐明ASVO的作用机制。 　　1材料 　　1.1仪器与设备 　　Thermo ITQ700（美国热电）气相色谱-质谱联用仪、 Thermo TR-5MS毛细管柱（0.25 mm×30 m，0.25 μm）（美国热电），YP1102H型分析天平（上海精密科学有限公司），加样器（Eppendorf公司），挥发油提取器（天津市天玻玻璃仪器有限公司），TBZ5-WS 多管架自动平衡离心机（湘仪），KQ-300DE型数控超声波清洗器（昆山市超市仪器有限公司），真空干燥箱（上海-恒科学仪器有限公司）。 　　1.2药品与试剂 　　叠氮钠、阿司匹林，购自上海中秦化学试剂有限公司；吡啶、乙腈、甲醇均为色谱纯试剂，购自美国Tedia 公司；甲氧胺盐酸盐、[N-甲基-三甲基硅烷-三氟乙酰胺（MSTFA）]-[三甲基-氯硅烷（TMCS）]100∶1均购自瑞士Fluka公司。当归购于甘肃岷县，经甘肃农业大学动物医学院中兽医教研室魏彦明教授鉴定为A.sinensis。 　　1.3动物 　　Wistar雄性大鼠50只，体重180～220 g，动物生产合格证号SCXK（甘）2009-004，购自兰州大学医学院实验动物中心。 　　2方法 　　2.1当归挥发油的提取及配制 　　准确称取当归200 g，粉碎后过40目筛粉粒，加入约1 000 mL蒸馏水，混于3 000 mL圆底烧瓶中，提前浸泡1 d。圆底烧瓶上接挥发油提取器、冷凝管，置于电热套50 V电压中，微沸腾后开始计时，提取8 h。将提取好的挥发油样品装入2 mL EP管中备用，用无水硫酸钠（Na2SO4）脱水，密封保存于4 ℃冰箱中备用[8-9]。给药前用0.5%的聚氧乙烯脱水山梨醇单油酸酯（吐温80）配成所需浓度的ASVO溶液[10]。 　　2.2分组及给药 　　50只雄性Wistar大鼠，在12 h充足光照、12 h黑暗，适合温度，适宜湿度条件下适应性饲喂5 d。然后按体重将大鼠随机分为5组，