肠杆菌科细菌IMP型金属酶流行病学特点及传播机制-临床检验诊断学专业论文.docxVIP

华中科技大学硕士学位论文 华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文 PAGE PAGE 1 摘 要 目的：了解肠杆菌科细菌中 IMP 型金属β-内酰胺酶的流行病学特点；对携带 IMP 耐药基因的质粒做整合子结构分析，以期发现 IMP 基因的传播机制。 方法：采用 K-B 法筛选同济医院 2007 年 8 月至 2011 年 10 月分离的肠杆菌科 细菌中对美罗培南及亚胺培南均不敏感的菌株，即抑菌环直径小于 23mm 的菌 株。用 PCR 方法检测 IMP 基因，并回顾分析 IMP 阳性菌株临床资料；用琼脂稀 释法检测常用抗菌药物对 IMP 阳性菌株的最低抑菌浓度（Minimum Inhibition Concentration， MIC），以获得 IMP 阳性菌株的药敏谱；用多位点序列分型 （Multiple Locus Sequence Typing, MLST）方法对 IMP 阳性的肺炎克雷伯菌和大 肠埃希菌进行同源性分型；用质粒接合试验检测携带 IMP 基因的耐药质粒的转 移性，并获得含有携带 IMP 基因质粒的接合菌，以进一步用重叠 PCR 方法分析 携带 IMP 基因的耐药质粒结构，探索其传播机制。 结果：2007 年 8 月至 2011 年 10 月同济医院共分离 125 株对美罗培南及亚胺培 南不敏感的肠杆菌科细菌，以肺炎克雷伯菌最为常见，其次为阴沟肠杆菌与大肠 埃希菌；用 PCR 方法检测 IMP 基因，28 株阳性，占 22.4%（28/125）。分析 IMP 阳性菌株的临床特点发现，菌株多分离自儿科患者（ 57.1%，16/28），并以痰标 本居多（71.4%，20/28）；琼脂稀释法药敏试验显示， IMP 阳性菌株对阿米卡星 和左氧氟沙星的敏感率高于 70%，对亚胺培南的敏感率为 71.4%，对美罗培南的 敏感率为 32.1%；肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌 MLST 结果显示出多种序列型别， 并且在 13 株肺炎克雷伯菌中发现了 4 个新的 ST 型（ST-734, ST-735, ST-736, ST-752）；通过接合实验获得 9 株含携带 IMP 基因质粒的接合菌，经整合子结构 分析发现，IMP 基因多以“单个基因盒”或串联Ⅰ型整合酶的形式存在。 结论：耐碳青霉烯类抗菌药物的肠杆菌科细菌检出率呈现上升的趋势，常见于 肺炎克雷伯菌。IMP 耐药基因多以单个基因盒的形式进行传播，最常见于整合子 的第一个基因盒位置。氟喹诺酮类抗菌药物可作为治疗 IMP 型金属酶阳性菌感 染的经验用药。 关键词：肠杆菌科细菌；IMP 型金属酶；药物敏感性；流行病学；整合子 ABSTRACT Objective: To understand the epidemiology characteris of IMP type metal beta-lactamase in Enterobacteriaceae isolates collected between August, 2007 and October, 2011 in Tongji hospital who are not susceptible to Carbapenems; In order to discover the dissemination characteristics of IMP gene, we analysed the integron structure of plasmid which carry IMP resistant gene. Methods: We screened out Enterobacteriaceae isolates which were not susceptible to meropenem and imipenem, the inhibition zone diameters of meropenem and imipenem were less than 23mm, by K-B disk diffusion method. These strains were collected between August, 2007 and October, 2011 in Tongji hospital; IMP gene were detected by PCR, and the clinical data of IMP positive strains were analysed retrospectively; The minimal inhibitory concentration (MIC) of IMP positive strains w