肠杆菌科细菌对碳青霉烯类药物耐药机制的研究-内科学专业论文.docxVIP

3 3 HYPERLINK \l _bookmark0 3.1.2 试验方法 36 HYPERLINK \l _bookmark1 3.2 结果 39 HYPERLINK \l _bookmark2 3.2.1 细菌 RNA 提取结果 39 HYPERLINK \l _bookmark3 3.2.2 膜孔蛋白 Real-time PCR 结果 39 HYPERLINK \l _bookmark4 3.3 讨论 41 HYPERLINK \l _bookmark5 第四部分 耐药基因水平传播能力的研究 43 HYPERLINK \l _bookmark6 4.1 材料和方法 43 HYPERLINK \l _bookmark7 4.1.1 实验材料与仪器 43 HYPERLINK \l _bookmark8 4.1.2 试验方法 45 HYPERLINK \l _bookmark9 4.2 结果 48 HYPERLINK \l _bookmark10 4.2.1 利用 PCR 技术扩增整合子并分析其基因序列 48 HYPERLINK \l _bookmark11 4.2.2 质粒结合结果 50 HYPERLINK \l _bookmark12 4.2.3 结合子体外药敏试验 50 HYPERLINK \l _bookmark13 4.2.4 EDTA 协同试验筛查结合子金属β-内酰胺酶 52 HYPERLINK \l _bookmark14 4.2.5 质粒提取 53 HYPERLINK \l _bookmark15 4.2.6 结合子质粒酶切结果 54 HYPERLINK \l _bookmark16 4.3 讨论 55 HYPERLINK \l _bookmark17 结 论 58 HYPERLINK \l _bookmark18 参考文献 60 HYPERLINK \l _bookmark19 致 谢 66 HYPERLINK \l _bookmark20 英汉缩略词对照表 67 HYPERLINK \l _bookmark21 肠杆菌科细菌产金属β-内酰胺酶的研究进展（综述） 69 肠杆菌科细菌对碳青霉烯类药物耐药机制的研究 摘 要 目的 本研究拟通过对四川省某三甲医院临床分离的 60 株多重耐药的 肠杆菌科细菌耐药谱进行分析，筛选出对碳青霉烯类抗生素耐药的肠 杆菌科细菌 10 株进行碳青霉烯酶表型、耐药基因、外膜蛋白的检测以 及检测整合子和质粒结合试验的研究，旨在阐明肠杆菌科细菌对碳青 霉烯类抗生素耐药的主要机制以及细菌耐药性的水平传播能力，对指 导临床合理使用抗生素，减少耐药菌株的产生、控制和预防耐药菌株 的流行提供科学依据。 方法 1. 收集四川省某三甲医院 2010 年 1 月-2011 年 5 月临床分离的多 重耐药的肠杆菌科细菌。2. 用琼脂稀释法检测多重耐药的肠杆菌科细 菌对 13 种抗生素的最低抑菌浓度（MIC），分析其耐药谱，筛选出对 碳青霉烯类抗生素耐药的肠杆菌科细菌。3. 改良 Hodge 试验筛查对碳 青霉烯类抗生素耐药菌株产碳青霉烯酶的情况。4. EDTA 双纸片协同 试验筛查对碳青霉烯类抗生素耐药菌株产金属 β-内酰胺酶情况。5. 利 用聚合酶链反应（Polymerase Chain Reaction, PCR）技术检测耐碳青霉 烯类抗生素菌株耐药基因，其测序结果与 GenBank 数据库进行比对。 6. 膜孔蛋白逆转录 Real-time PCR 分析耐药株膜孔蛋白的表达情况。 7. 利用 PCR 技术扩增耐碳青霉烯类抗生素菌株整合子并分析其基因 PAGE PAGE 5 序列。8. 利用质粒结合试验研究耐碳青霉烯类抗生素菌株耐药性的水 平传播能力。 结果 1. 收集 60 株四川某三甲医院临床分离的多重耐药的肠杆菌科细 菌。2. 本研究利用琼脂稀释法药敏试验对 60 株临床分离的多重耐药 的肠杆菌科细菌的耐药谱进行分析，有 10 株细菌对碳青霉烯类抗生素 耐药，其中包括：5 株肺炎克雷伯菌，4 株阴沟肠杆菌和 1 株植生拉乌 尔菌。多重耐药菌株中对碳青霉烯类抗生素耐药菌株的分离率为 16.67%。这 10 株细菌对厄他培南、美罗培南、亚胺培南的耐药率分 别为 100%、70%、10%。对头孢曲松钠、头孢他啶、和头孢哌酮/舒 巴坦的耐药率均为 100%，头孢西丁钠和头孢吡肟的耐药率分别为 90%、80%。对阿米卡星和多粘菌素 B 的敏感率最高，分别为 90%和 80%。3. 改良 Hodge 试验在 10 株耐碳青霉烯类抗生素细菌中检测有 7 株阳性，菌株分别为 K13、K25、K30、E3、E8、E13