生存素与血管内皮生长因子在大肠癌组织中的表达与临床意义.pdfVIP

凼粒匡堂筮亟±班塞生堂焦迨塞(!!盟2 (5)蒸馏水冲洗3分钟×1次，PBS冲洗3分钟×1次，蒸馏水冲洗3分钟×1次。 (6)微波修复：将切片浸入微波炉内已沸腾的柠檬酸缓冲液中，高中火加热12分 钟。 (7)取出，室温冷却。PBS冲洗3分钟x3次。 (8)滴加5％BSA封闭液(血清)，覆盖组织，室温孕育10分钟。 (9)除去封闭液，每张切片滴加第一抗体，于湿盒内，40C过夜。阴性对照使用PBS 缓冲液代替一抗工作液，其余操作相同。 (10)PBS冲洗3分钟x3次。 (11)除去PBS液，每张切片滴加I滴生物素标记的第二抗体(IgG)，室温下孵育 20分钟。 (12)PBS冲洗3分钟x3次。 (13)除去PBS液，每张切片滴加1滴SABC液，室温下孵育20分钟。 (14)PBS冲洗3分钟x3次。 察染色情况，调整染色时间)。 (16)自来水冲洗，苏木素复染5分钟，自来水冲洗，l％盐酸分化，自来水冲洗，返 蓝。 干燥，二甲苯(二甲苯10分钟x2次)透明，中性树胶封片。 1．5结果判定 ,turvivin和VEGF阳性染色定性标准为肿瘤细胞胞质内出现棕黄色颗粒；定量标 图象分析系统对survivln、VEGF蛋白表达进行分析，用平均灰度值来表示，平均灰度值 大(染色强度弱、透光度强)，蛋白表达少，反之则表达多。 1．6统计学处理 ,urvivin和VEGF在大肠癌组织与癌旁组织中的表达情况及与大肠癌临床病理因 具有显著性差异。应用SPSSl2．0统计软件进行统计学处理。 出塞直蜃茎睦亟±班塞生差焦造塞【!!盟2 2．结果 2．1survivin在大肠癌及癌旁组织中的表达情况 survivin阳性染色呈棕黄色颗粒物，在大肠腺体中均为细胞质着色，在细胞问质中 有少部分细胞核着色，且在大肠癌组织中呈强表达(图1)，在癌旁组织内弱表达或不 表达(图2)o结果显示，survivin在大肠癌组和癌旁对照组问表达的差异具有非常显著 性意义(PO．01)，具体情况见表1。 2．2YEGF在大肠癌及癌旁组织中的表达情况 VEGF阳性物质为棕黄色和棕褐色颗粒，定位于腺细胞胞浆内。VEGF在大肠癌 组织内呈强表达(图3)，在癌旁组织内弱表达或不表达(图4)。两组问差异有非常显 著性意义(PO．01)，见表l。 表1 survivin爱VEGF在大肠癌组织和癌旁组织中的表达(夏±s) 2．3大肠癌组织中survivin和VEGF的表达与临床病理因素之间的关系 经检测大肠癌组织中survivin的表达与分化程度和淋巴结转移有关，差异具有非 VEGF的表达与分化程度、淋巴结转移和浸润深度有关，差异具有非常显著性意义(P 0．01)。见表2。 裹2 大肠癌日lr订血和VECF的衰达与临床病理因素的关系(i±s) 直鐾直匿堂睦亟±塑生兰垡迨塞f；!盟2 2．3大肠癌组织中survivin和VEGF表达的相关性分析 经统计学处理，结果显示，survivln的阳性表达与VEGF的阳性表达有依从关系(P O．01)，二者呈正相关，相关系数r为0．978(图7)。 VEGF 图7大肠癌中survjVin和VEGF表达的相关性散点图 3．讨论 大肠癌是世界上发病率较高的消化道恶性肿瘤，预后差，严重威胁人类的生命健 康。大肠癌的过度生长、浸润和转移是其重要的生物学行为，也是直接影响预后的主 要原因。这一过程受到多种因素的影响，其中以细胞凋亡和增殖失衡、肿瘤诱导的血 管生成反应最为重要。 3．1关于survivln在大肠癌的发生、发展过程中起的作用和临床意义 cell protease 796 ap- optoslsproteins，IAP)家族的新成员【I】，