葛根调节脂肪细胞糖脂代谢改善胰岛素抵抗的研究お.docVIP

葛根调节脂肪细胞糖脂代谢改善胰岛素抵抗的研宄朽 ［ ］该实验通过检测葛根对胰岛素抵抗(IR) 3T3L1脂肪细胞葡萄糖消耗，甘油三脂(TG)含量及 PPAR y , ADPN, GLUT4, LPL, FABP4, FASn 表达 量的影响来探讨葛根调节糖脂代谢改善脂肪IR的作 用机制。先采用3T3L1前脂细胞诱导分化的成熟脂肪 细胞，地塞米松诱导建立IR模型，将脂肪细胞分为正 常组，IR模型组，罗格列酮阳性组，低、中、高剂量 葛根含药血清组，以葡萄糖氧化酶过氧化物酶(glucose oxidaseperoxidase, GODPOD)法检测细胞培养液葡 萄糖含量和甘油磷酸氧化酶(glycerol phosphate oxidase, GPOPOD)法测定胞内TG含量，荧光定量 qPCR 检测 PPAR 丫，ADPN, GLUT4, LPL, FABP4 (aP2)，FASn基因mRNA水平。结果显示1 u mol?L-l地塞米松作用3T3L1脂肪细胞96h，与正常 组比较，模型组葡萄糖消耗量降低(P ［关键词］葛根含药血清；胰岛素抵抗；3T3L1 脂肪细胞；糖脂代谢 葛根为豆科植物野葛Pueraria lobata (Willd) Ohwi的干燥根，始载于《神农本草经》，具有解肌退 热、透发麻疹、生津止渴、升阳止泻等功效。统计表 明在改善胰岛素抵抗(insulin resistance，IR)治疗2 型糖尿病(type 2 of diabetes mellitus，T2DM)的临床 用药中，葛根使用率位于第5位［1］。葛根具备清热燥 湿凉血功效，可增强胰岛素敏感性。动物实验显示葛 根改善ob/ob小鼠糖耐量和脂质代谢［2］。临床研究显 示，葛根煎剂联合非诺贝特治疗高脂蛋白血症，能显 著降低总胆固醇和甘油三酷(triglycerides，TG)含量， 升高高密度脂蛋白水平，在改善高脂血症病人脂质水 平上优于单用非诺贝特治疗［3］。除与西药联合治疗 外，与葛根适当配伍的许多中药复方显示良好降糖效 果，如葛根芩连汤复方在随机双盲临床实验降低空腹 血糖和糖化血红蛋白，显示稳定降糖药效［45］。本课 题组在均匀设计葛根芩连汤配伍动物实验中发现重用 葛根配比能产生更优的降糖降脂药效。葛根的主要药 效成分为异黄酮类化合物，包含葛根素、大豆苷元、 染料木黄酮等，其中葛根素为葛根特有药效成分，研 宄己经证明，葛根素具有抗高胆固醇、抗炎、降血糖、 神经保护等多种功效，临床实验显示葛根素可降低空 腹血糖，促进3细胞分泌胰岛素［6］;动物实验显示其 通过降糖，影响细胞信号通路，增加大鼠骨骼肌细胞 膜葡萄糖转运蛋白 4 (glucose transporter type 4， GLUT4)含量，改善IR［7］。深入研宄葛根的调节糖 脂代谢改善IR的机制可为葛根配伍的降糖降脂中药 复方提供科学依据和理论基础。 血清药理学方法是公认中药复方体外细胞研宄的 可行性方法，本实验运用血清药理学研宄方法，研究 葛根含药血清(GeGen containing serum，GGCS)干 预IR3T3L1脂肪细胞的降糖降脂药效，并在药效基础 上检测过氧化物酶体增殖物激活受体丫 (peroxisome proliferators activated receptor gamma，PPAR 丫)，月旨耳关 素(adiponectin，ADPN)，GLUT4,脂肪蛋白酶 (lipoprotein lipase，LPL)，脂转运结合蛋白 4 (fatty acid binding protein 4, FABP4)和脂肪酸合成蛋白(fatty acid synthase, FASn)表达水平，探讨葛根含药血清 调节糖脂代谢改善3T3L1脂肪细胞IR的作用机制。 1材料 1.1动物SPF级雄性SD大鼠，购于北京维通利 华实验动物技术有限公司，合格证号SCXK (京) 201.20001 o 1.2细胞株3T3L1小鼠前脂肪细胞株，购于美国 ATCC,批号 62.99684.7。 1.3药物葛根(野葛)购自江中饮片厂，批号 1.5092.9,葛根素质量分数为5.5%，符合201.5年版 《中国药典》标准。 1.4试剂葛根素（批号1.204），大豆苷元（批号 1.502.200101）均购自四川省克奇生物科技有限公司； DMEM高糖培养基（Hyclone公司，批号NAE1.3.96）; 胎牛血清（浙江天杭生物科技有限公司，批号 1.502.1.5）;新生牛血清（Life technologies 公司，批号 1.5.1.792.3）； 3异丁基1甲基黄嘌呤 （3isobutyl 1 methylxanthine, IBMX,批号 1.5.879）， 地塞米松（批号82.2A05.2