高迁移率族蛋白B1对肝癌细胞侵袭能力的影响及机制的初步研究-外科学专业论文.docxVIP

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高迁移率族蛋白B1对肝癌细胞侵袭能力的影响及机制的初步研究-外科学专业论文

宁夏医科大学学位论文独创性声明 本人郑重声明:所呈交的学位论文,是个人在导师的指导下,独立进 行研究工作所取得的成果,无抄袭及编造行为。除文中已经特别加以注明 引用的内容外,本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品 成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体,均已在文中以明确方式 标明并致谢。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。 论文作者签名_____ 论文导师签名_____ 年 月 日 年 月 日 宁夏医科大学关于学位论文使用授权的声明 宁夏医科大学有权保留使用本人学位论文,同意学校按规定向国家有 关部门机构送交论文的复印件和电子版,允许被查阅和借阅。本人授权宁 夏医科大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检 索,可以采用影印、缩印或其他复印手段保存和汇编本学位论文。可以公 布(包括刊登)论文的全部或部分内容。 (保密论文在解密后应遵守此规定) 论文作者签名_____ 论文导师签名_____ 年 月 日 年 月 日 宁夏医科大学硕士研究生学位论中文摘要 宁夏医科大学硕士研究生学位论 中文摘要 高迁移率族蛋白 B1 对肝癌细胞侵袭能力的影响及机制的初步研究 摘 要 目的 原发性肝癌是临床上最常见的恶性肿瘤之一,根据最新统计,全世界每年新 发肝癌患者约六十万,居恶性肿瘤的第五位。关于 HMGB1 与肝细胞癌关系的研究也已开 展。有研究表明 HMGB1 在胃癌、食管癌、胰腺癌、结肠癌中表达增高,但具体作用机制 尚不明确。本实验研究,我们通过检测肝癌、癌旁组织及正常肝组织中 HMGB1 的表达情 况,并使用 RNA 干扰技术合成针对高迁移率族蛋白 B1(HMGB1)的 siRNA,观察其对人 肝癌细胞株 HepG2 侵袭迁移能力的影响,并对其意义及机制进行探讨分析。 方法 (1)收集取病理证实的肝细胞癌组织标本 10 例,另选取经病理证实为肝细 胞癌癌旁的正常肝组织 10 例作为对照。用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及蛋白印迹 法(Western blot)检测肝癌与癌旁组织、人肝癌细胞株 HepG2 与正常肝细胞株 L-02 中 HMGB1 表达的差异;(2)RNA 干扰技术合成 3 对特异性针对 HMGB1 的 HMGB1-siRNA 并 转染 HepG2,设置空白组与对照组,并使用 Western bllot 技术检测沉默效果;(3)选 择沉默效果最好的 HMGB1-siRNA,应用跨膜迁移实验、平面迁移实验检测细胞侵袭迁移 能力的变化;(4)通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及蛋白印迹法(Western blot) 方法进一步分别测定 HMGB1-siRNA 转染进入 HepG2 后的 MMP2、MMP9、ICAM1 和 TIMP2 的 mRNA 和蛋白表达水平。 结果 实验结果表明肝癌组织较癌旁组织 HMGB1 表达水平明显增加,肝癌细胞株 HepG2 较正常肝细胞株 L-02 中 HMGB1 也明显增高(均 P0.05);HMGB1-siRNA 转染后可 明显降低 HepG2 中 HMGB1 的表达,其中 HMGB1-siRNA-1 的沉默效率最高(P0.05),用 40 nM 的 HMGB1-siRNA-1 对 HMGB1 的抑制效率在 24、48、72h 均达 80%以上,96h 后明 显下降(均 P0.05);用 40 nM 的 HMGB1-siRNA-1 转染 HepG2,24 h 后 HepG2 细胞迁移 和侵袭能力下降(均 P0.05)。转染后 MMP2、MMP9、ICAM1 的 mRNA 表达明显下调,而 TIMP2 的 mRAN 表达明显上调(均 P0.05)。 结论 HMGB1 在肝癌中高表达,可促进肝癌细胞的侵袭迁移,通过 HMGB1-siRNA 抑 制肝癌细胞中 HMGB1 表达可明显降低肿瘤细胞侵袭迁移能力。HMGB1 表达抑制后,MMP2、 MMP9、ICAM1 表达下调,TIMP2 表达上调,说明 HMGB1 对肝癌细胞的侵袭迁移能力与 MMP2、 MMP9、ICAM1 和 TIMP2 的表达有关。这可能是肝癌治疗潜在的靶基因。 关键词 高迁移率族蛋白 B1,肝细胞癌,小干扰 RNA,侵袭迁移 宁夏医科大学硕士研究生学位论英文摘要 宁夏医科大学硕士研究生学位论 英文摘要 The effect of HMGB1 on invasive and migration ability to hepatoma cell and the preliminary study on its mechanism ABSTRACT Objectives: Primary hepatic carcinoma is one of the most commonly see

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