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高迁移率族蛋白B1对肝癌细胞侵袭能力的影响及机制的初步研究-外科学专业论文
宁夏医科大学学位论文独创性声明
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宁夏医科大学硕士研究生学位论中文摘要
宁夏医科大学硕士研究生学位论
中文摘要
高迁移率族蛋白 B1 对肝癌细胞侵袭能力的影响及机制的初步研究
摘 要
目的 原发性肝癌是临床上最常见的恶性肿瘤之一,根据最新统计,全世界每年新 发肝癌患者约六十万,居恶性肿瘤的第五位。关于 HMGB1 与肝细胞癌关系的研究也已开 展。有研究表明 HMGB1 在胃癌、食管癌、胰腺癌、结肠癌中表达增高,但具体作用机制 尚不明确。本实验研究,我们通过检测肝癌、癌旁组织及正常肝组织中 HMGB1 的表达情 况,并使用 RNA 干扰技术合成针对高迁移率族蛋白 B1(HMGB1)的 siRNA,观察其对人 肝癌细胞株 HepG2 侵袭迁移能力的影响,并对其意义及机制进行探讨分析。
方法 (1)收集取病理证实的肝细胞癌组织标本 10 例,另选取经病理证实为肝细 胞癌癌旁的正常肝组织 10 例作为对照。用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及蛋白印迹 法(Western blot)检测肝癌与癌旁组织、人肝癌细胞株 HepG2 与正常肝细胞株 L-02 中 HMGB1 表达的差异;(2)RNA 干扰技术合成 3 对特异性针对 HMGB1 的 HMGB1-siRNA 并 转染 HepG2,设置空白组与对照组,并使用 Western bllot 技术检测沉默效果;(3)选 择沉默效果最好的 HMGB1-siRNA,应用跨膜迁移实验、平面迁移实验检测细胞侵袭迁移 能力的变化;(4)通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及蛋白印迹法(Western blot) 方法进一步分别测定 HMGB1-siRNA 转染进入 HepG2 后的 MMP2、MMP9、ICAM1 和 TIMP2 的 mRNA 和蛋白表达水平。
结果 实验结果表明肝癌组织较癌旁组织 HMGB1 表达水平明显增加,肝癌细胞株 HepG2 较正常肝细胞株 L-02 中 HMGB1 也明显增高(均 P0.05);HMGB1-siRNA 转染后可 明显降低 HepG2 中 HMGB1 的表达,其中 HMGB1-siRNA-1 的沉默效率最高(P0.05),用 40 nM 的 HMGB1-siRNA-1 对 HMGB1 的抑制效率在 24、48、72h 均达 80%以上,96h 后明 显下降(均 P0.05);用 40 nM 的 HMGB1-siRNA-1 转染 HepG2,24 h 后 HepG2 细胞迁移 和侵袭能力下降(均 P0.05)。转染后 MMP2、MMP9、ICAM1 的 mRNA 表达明显下调,而 TIMP2 的 mRAN 表达明显上调(均 P0.05)。
结论 HMGB1 在肝癌中高表达,可促进肝癌细胞的侵袭迁移,通过 HMGB1-siRNA 抑
制肝癌细胞中 HMGB1 表达可明显降低肿瘤细胞侵袭迁移能力。HMGB1 表达抑制后,MMP2、
MMP9、ICAM1 表达下调,TIMP2 表达上调,说明 HMGB1 对肝癌细胞的侵袭迁移能力与 MMP2、 MMP9、ICAM1 和 TIMP2 的表达有关。这可能是肝癌治疗潜在的靶基因。
关键词 高迁移率族蛋白 B1,肝细胞癌,小干扰 RNA,侵袭迁移
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