高迁移率族蛋白B1在严重烧伤延迟复苏大鼠急性肺损伤中的作用和初步机制-外科学(烧伤)专业论文.docxVIP

PAGE PAGE 1 缩写对照表 HMGB1 high mobility group box B1 高迁移率族蛋白B1 ALI acute lung injury 急性肺损伤 BALF bronchoalveolar lavage fluid 支气管肺泡灌洗液 TNF-α tumor necrosis factor-α 肿瘤坏死因子-α IL-8 interleukin-8 白细胞介素-8 IL-6 interleukin-6 白细胞介素-6 IHC immunohistochemistry 免疫组织化学 ELISA enzyme-linked immunosorbent assay 酶联免疫吸附 OD optical density 光密度 ICAM-1 intercellular adhesion molecule-1 细胞间粘附分子-1 MDA malondialdehyde 丙二醛 MPO myeloperoxidase 髓内过氧化物酶 p38 MAPK p38 mitogen-activated protein kinase p38 丝裂原活化的蛋白激酶 JNK c-Jun N-terminal kinase c-Jun 氨基末端激酶 中文摘要 高迁移率族蛋白 B1 在严重烧伤延迟复苏大鼠急性肺损 伤中的作用和初步机制 一、研究背景 急性肺损伤(acute lung injury, ALI)是大面积深度烧伤患者最常见的并发症之 一，特别是在合并吸入性损伤、休克、延迟复苏等情况下更易发生。它导致机体 缺氧，作用于机体各个器官、系统，造成组织、细胞坏死和功能障碍，继而出现 多器官功能障碍综合症（Multiple Organ Dysfunction Syndrome, MODS），引起死 亡。目前已经明确：炎症反应失控所导致的弥漫性肺泡毛细血管损伤是 ALI 的主 要病理基础。 高迁移率族蛋白B1（High mobility group box 1，HMGB1）是一种广泛存在高 度保守的DNA结合蛋白，在DNA 重组、修复、复制和基因转录中起重要作用。近 年研究表明，在炎症和创伤等因素的作用下，固有免疫细胞会主动分泌HMGB1， 机体坏死细胞也被动释放HMGB1，作用于单核/巨噬细胞、内皮细胞和中性粒细胞 等，诱导其合成并分泌其它炎症介质。HMGB1被认为既是炎症早期的启动者，又 是炎症晚期的促进者。目前有关HMGB1在严重烧伤后急性肺损伤发生中的作用如 何，尚不明确。 本实验采用严重烫伤延迟复苏大鼠为主要研究对象，动态观察急性肺损伤时 肺组织中HMGB1的表达规律，并使用HMGB1抑制剂正丁酸钠进行干预，观察血 清及肺泡灌洗液中促炎性细胞因子TNF-α和趋化因子IL-8的变化以及肺脏MAPK信 号转导通路的活化情况，以了解HMGB1在严重烫伤延迟复苏急性肺损伤中的作用 和机制，以进一步认识烧伤后急性肺损伤的发生机制并为其防治提供新的思路和 方法。 二、研究目的 1. 探讨 HMGB1 在严重烧伤延迟复苏大鼠急性肺损伤中的作用； 2. 研究 HMGB1 在严重烧伤延迟复苏大鼠急性肺损伤中作用的初步机制。 三、研究内容 第一部分 HMGB1 在严重烧伤延迟复苏大鼠急性肺损伤中的作用 健康成年雌性 Sprague-Dawley 大鼠 56 只，体重 200-250 g，，由安徽医科大学 实验中心提供。常温下饲养一周，随机分为正常对照组（8 只）、烧伤延迟复苏组 （24 只）和烧伤延迟复苏+正丁酸钠组（24 只）。致伤前大鼠腹腔注射 3% 戊巴比 妥钠(30 mg/ kg)麻醉，烧伤组大鼠用恒温水烫仪以 98°C 水烫背部 12 s，造成大鼠 30% TBSA Ⅲ°烧伤（病理证实）。烧伤延迟复苏组大鼠伤后 6h、12h、36h 以 2ml·/(kg?TBSA) 给予乳酸林格氏液腹腔注射进行液体复苏。正丁酸钠 （Sigma-Aldrich 公司，美国）用乳酸林格氏液稀释成 1:150，烧伤延迟复苏+正丁 酸钠组以相同的时间点和途径给予等量含正丁酸钠的乳酸林格氏液，即正丁酸钠 每次剂量为 400mg/kg。烧伤大鼠分别于伤后 12h、24h 和 48h 经心脏取血后处死， 行支气管肺泡原位灌洗，ELISA 法测定血清和支气管肺泡灌洗液（bronchoalveolar lavage fluid，BALF）中 TNF-α 和 IL-8 含量，同时测定肺脏含水量，作肺脏病理学 检查和 HMGB1 表达检测（Western blot 法），并观察肺组织细胞间粘附分子 1 （intercellular adhesion molecule-1，ICAM-1）蛋白表达的差异（免疫组化法）。正 常对照组大鼠进行相同的麻醉