细胞衰老分子机理研究进展.ppt

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p16表达调控研究 * 绿色荧光蛋白量与其荧光强度成正比 绿色荧光蛋白量与其荧光强度成正比 -280~-622区段青,老差别的变化最大 不同长度 p16调控区 的 启动活性分析 * p16基因翻译起始信号ATG以远上游 -491 ~ -485 bp 处存在我们称为ITSE (INK4a Transcription Silence Element,p16转录沉寂元件)的负调控元件。 * 衰老过程中α-2-巨球蛋白、 p16Ink 4a和p21Waf1基因表达与代龄关系 α-2-巨球蛋白 p16Ink4a p21Waf1   将α-2-巨球蛋白,与众所公认的细胞衰老时表达增强的基因p16Ink4a及p21Waf1相比较,从中选出最适合作为衰老标志物的基因. * Northern blot 检测2BS细胞衰老过程中 α-2-巨球蛋白(alpha-2- macroglobulin, α2M)的基因表达情况 GAPDH α2M 代龄  28   42 52  62 细胞衰老标志基因的选定 * 结论: α-2-巨球蛋白基因表达,与体外培养倍增次数线性关系良好,易检出,易定量是一项很好的衰老生物学标志,并有望用于检测整体水平或组织细胞的衰老。 马 宏等(Ma H , et al)Exp Gerontol 2004 * 衰老细胞核出现“衰老相关异染色质聚集位点”(senescence- associated heterochromatic foci,SAHF) 染色质在核中的分布,呈点状聚集而非均一分布 李 倩 等:SAHF——细胞衰老生物学新标志 。 生物化学与生物物理进展 2007,34:1123-1128. * ????1.寻找影响细胞衰老的新基因 发现:延缓衰老的CSIG与RDL ???? 证明:导入CSIG或RDL基因可延长细胞寿命。 2.研究各种因素(如氧自由基)对衰老进程的影响 3.用于研究已知基因对细胞衰老的影响 ?? 发现:已知基因TOM1可加速衰老,抑制可延长细胞寿命 证明:基因导入可影响细胞衰老,可加速,也可延缓。 ????4.检验药物抗衰作用,为中药现代化提供技术支撑 细胞衰老指征的应用 * 为验证我室建立的衰老指标评价体系,评估抗衰新药,我们研究了黄芪碱HDTIC的抗衰作用。 检验药物抗衰作用,为中药现代化提供技术支撑 能否确定被试物的 延衰作用? 能否比较被试物延衰作用的细微差别? * 黄芪碱 同分异构体 以公认有延缓衰老作用的肌肽(carnosine)为阳性对照,以上述生物学指征进行定量比较。 成果应用 结构差异 (黄芪碱1)(黄芪碱2) (A)HDTIC-1, (B)HDTIC-2 * 黄芪碱的抗衰效应强于肌肽(carnosine) 黄芪碱(HDTIC)可 延长细胞寿命20代( CPDs) 成果应用 (黄芪碱1) (黄芪碱2) * 黄芪碱可减慢端粒(Kb数)缩短速度 28代 55代 对照 8.93?0.54 7.01?0.43 0.1μM 黄芪碱1 8.93?0.54 8.08?0.49 成果应用 * 阳性(绿色)率随代龄的增加而增加 黄芪碱可降低衰老相关β半乳糖苷酶活性 ( 28代) ( 55代) 1.0μM黄芪碱-2 ( 56代) 成果应用 0.1μM黄芪碱-1 ( 58代) * DNA损伤修复能力 随增龄下降 损 伤 修 复 损 伤 修 复 修复良好 修复不良 黄芪碱可提高DNA损伤修复能力 成果应用 衰老细胞 年轻细胞 尾长(μm) 面积/总面积(%) ? 对照 122.42±6.21 92.12±3.25 ? 0.1μM黄芪碱-

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