降解烟叶果胶质和纤维素微生物的筛选及应用效果研究-食品科学专业论文.docxVIP

郑州烟草 郑州烟草研究院硕士学位论文 中文摘要 PAGE PAGE VI 摘要 烟草中果胶质和纤维素在卷烟燃烧过程中产生多种有害成分，利用微生物技 术可减少其含量。通过透明圈法结合果胶酶活测定从醇化片烟中分离筛选到一株 高产果胶酶菌株 TS63-9，通过刚果红染色法、滤纸平板法分离筛选到一株产纤 维素酶活较高的菌株 C9-13，并对上述 2 菌株进行了鉴定。菌株经发酵条件优化 后，将发酵粗酶液分别添加应用于烟丝中，评价其应用效果。主要结论如下： （1）通过观察菌落及菌株显微形态特征，结合 ITS 序列比对分析，将产果胶 酶菌株 TS63-9 初步鉴定为疣孢青霉（Penicillium verruculosum）。TS63-9 果胶酶 最适反应温度为 55℃，在 40℃下具有较高的稳定性；最适反应 pH 为 4.0，在 pH4.0～6.0 之间有较高稳定性。TS63-9 产果胶酶菌株液体发酵优化条件为：碳 源烟梗粉末 7.5g/L，氮源 NH4(SO4)21.4g/L、尿素 0.3g/L、蛋白胨 1.0g/L，培养温 度 28℃，起始 pH6.0，培养时间 72h，其余不变。在此条件下，获得发酵粗酶液 果胶酶活为 832.49U·mL-1。 （2）TS63-9 菌株发酵粗酶液处理烟丝，在 5mL/100g、10mL/100g、15mL/100g 三个添加水平下，果胶含量分别降低 11.5%、40.3%、45.1%；常规化学成分除总 糖、还原糖有所升高外，其余变化不大；感官品质在一定程度上得到改善，主要 表现为烟气浓度增大；利用扫描电镜观察烟丝表面细胞排列特征，处理样品细胞 间隙变大。 （3）通过观察菌落特征和菌株显微形态结构，并结合 ITS 序列比对分析， 将产纤维素酶 C9-13 菌株初步鉴定为深绿木霉（Trichoderma atroviride）。C9-13 菌 株 产 纤 维 素 酶 的 液 体 发 酵 优 化 条 件 为 ： 碳 源 小 麦 秸 秆 粉 末 20g/L， 氮 源 NH4(SO4)21.4g/L、尿素 0.3g/L、蛋白胨 1.0g/L，培养温度 28℃，起始 pH6.0，培 养时间 72h，其余不变。在此条件下，获得粗酶液 CMCA 大小为 25.21U·mL-1、 FPA 大小为 7.64U·mL-1。 （4）C9-13 菌株发酵粗酶液处理烟丝，在 5mL/100g、10mL/100g、15mL/100g 三个添加水平下，纤维素含量分别降低 6.81%、11.83%、21.50%；常规化学成分 除总糖和还原糖含量升高外，其余成分变化不大；烟丝感官评吸质量得到改善， 香气质更加突出，香气量增加，杂气减轻，口感有所改善。 关键词: 烟草 果胶 纤维素 疣孢青霉 TS63-9 菌株 深绿木霉 C9-13 菌株 酶活 发酵条件 感官品质 郑州烟草 郑州烟草研究院硕士学位论文 英文摘要 Abstract Pectin and cellulose have adverse effects on tobacco quality, for producing many kinds of harmful ingredients in smoke during combustion process. It would be probable to reduce the contents of these two chemical compositions with microbial technology. Strain TS63-9 with higher pectinase activity was screened from aged tobacco strips, on the basis of the assaying results of pectinase activity of isolates got using transparent circle method. Strain C9-13 with higher cellulase activity was screened using preliminary screening methods of Congo red staining and filter plate following with cellulase activity assay. The two strains were identified afterwards. The enzyme production conditions of the strains were optimized. Then, the crude enzyme solutions from th