胶原凝胶及壳聚糖基因载体的制备-无机化学专业论文.docxVIP

长春理工大学硕士学位论文原创性声h月 长春理工大学硕士学位论文原创性声h月 本人郑重声明：所呈交的硕士学位论文，《胶原凝胶及壳聚糖基因载体的制备》是 本人在指导教师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的 内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的 研究做出重要贡献的个人和集体．均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声 明的法律结果由本人承担。 作者簦#：叁l自12：野坠年—!￡-月—芝口 长春理工大学学位论文版权使用授权书 本学位论文作者及指导教师完全了解“长春理工大学硕士、博士学位论文版权使用 规定，同意长春理工大学保留并向国家有关部门或机构送交学位论文的复印件和电子 版，允许论文被查阅和借阅。本人授权长春理工大学可以将本学位论文的全部或部分 内容编入有关数据库进行检索，也可采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编学 位论文。 储签名：基l!继fF生月土u舡自掣一J 摘 摘 要 本文为载基因的壳聚糖胶原凝胶基因治疗提供了前期准备工作。 选用酶消化法，以牛腱为原料提取胶原，保证提取的胶原具有三股螺旋结构。并 对提取的胶原进行的相应的表征工作。测定了胶原提取液的粘度和固体含量。研究了 胃蛋白酶消化法中酶与材料的最佳配比为E：B=I：10。经红外、紫外光谱分析确定提 取物为胶原。同时用提取的胶原制各胶原凝胶．测定胶原凝胶中固体古量。在胶原凝 胶中培养细胞．用光学显微镜进行观察细胞生长状态．证明胶原凝胶可以作为细胞生 长的立体三维生长支架。 另外，对天然的壳聚糖进行了一系列生物学表征工作．凝胶阻滞电泳实验证明壳 聚糖具有一定的DNA结合能力。粒径电位分析表明壳聚糖与DNA形成了粒径在 100～300hm．表面电位稳定的纳米复合物颗粒。MTT实验测试了壳聚糖的没有细胞毒 性。证明了壳聚糖可以作为基因载体。 关键词：脏原胶原凝胺细胞相容性壳聚糖基因载体 ABSTRACTThis ABSTRACT This paper provides prerequisite preparation for gene therapy of Collagen geI containing chitosan gene The method of enzyme digestion was used to extract collagen from bovine tendon SO that triple helix of collagen molecules can be maintained And the extracted collagen was characterized The extracted collagen viscosity and solid content、^ere measured In pepsin digest method the best ratio for enzymes and maleria】jS that E to B equals I to 10 The extracted protein was confirmed to be collagen by FTIR and UV．At the same time collagen gel was prepared by the extracted collagen and coIlagen gel solid content uas measured The cell was seeded in collagen gel The cell gromth state was obser、ed by optical microscope and the results show that the collagen geI carl be used aS 3D cell scaffold In addition．a series of biology characterizations of natura】chitosan were made The results of gel retardation experiment jndicated the ehitosan had stronQ affjMix—to DNA CS-DNA could form composite nano．particles unh diameters from】00 to 300 nm and the surface potential is stable The c)lotoxicity was measured by MTT experiment that the results showed chitosan ha