胶原基含糖半互穿网络聚合角膜替代物体内外生物相容性研究-临床医学；眼科学专业论文.docxVIP

天津医科大学硕士学位论文中文摘要 天津医科大学硕士学位论文 中文摘要 研究目的 评价胶原基含糖半互穿网络角膜替代物在体外以及兔角膜组织中的生物 相容性，以探讨其作为角膜支架材料的可行性。 方法 第一部分：体外生物相容性研究，选择中国大耳白兔1只，雌雄不限，2．0．2．5kg， 由天津医科大学基础实验动物中心提供，排除角膜疾患。胶原基含糖半互穿网 络角膜替代物材料由天津大学材料科学与技术学院提供。材料性能：直径12mm， 厚度300pm，白光透过率90％以上，平衡含水量90％以上，抗张强度0．6土0．Impa， 体外胶原酶(12微克／毫升)降解试验，30小时内剩余质量在40％以上。取材： 速眠新(静松灵、乙二胺四乙酸(EDTA)、盐酸二氢埃托啡和氟哌啶醇的复方制 剂)和氯胺酮进行肌肉注射麻醉，兔眼周围予以清洁消毒铺巾，开睑器开眼，抗 生素盐水冲洗结膜囊，在显微镜下用隧道刀对角膜缘上皮进行剖切，剪下角膜 缘上皮组织，再剪成1 mm×lmm大小的组织块均匀铺于胶原基含糖半互穿网络 聚合角膜替代材料及半透膜上。倒置显微镜对体外构建的角膜上皮细胞生长速 度，形态等进行观察，两周后将培养细胞行苏木精一伊红(HE)染色。 第二部分：体内生物相容性研究，实验组48眼，单眼前板层植入胶原基含糖半 互穿网络角膜替代物材料，对照组48眼行同种异体角膜前板层移植，其余24 只白兔为板层角膜供体。角膜移植术后3天、7天、1 5天、1个月、3个月、6 个月进行肉眼及裂隙灯观察，观察内容包括：角膜透明度及新生血管情况，术 后3天、7天、15天、1个月、3个月、6个月分别处死每组动物中的8只，术 眼固定于10％Ep醛溶液中，行HE染色在光镜下进行兔角膜组织病理学观察及上 皮细胞标志蛋白K3的免疫组化检测。评分结果采用Wileoxon符号秩和检验判 断实验组和对照组在角膜透明度及新生血管情况方面有无统计学差异。 结果 第一部分 1．倒置显微镜观察，5天左右组织块细胞向周围融合成单层，细胞呈膜状生长， 生长界限明显，成沙滩样外观，细胞问相互紧密连接，接近组织块的区域可 天津医科大学硕士学位论文呈复层生长，持续培养2周，细胞呈复层生长。气液界面培养可以形成连续 天津医科大学硕士学位论文 呈复层生长，持续培养2周，细胞呈复层生长。气液界面培养可以形成连续 的上皮细胞层，细胞和载体之间连接较牢固。 2．HE染色显示体外构建的角膜上皮具有复层扁平上皮的结构。 第二部分 1．术后实验组及对照组角膜透明度逐渐升高，术后3天、7天、15天两组透明 度比较差异有统计学意义(PO．05)，术后1个月、3个月及6个月与对照组 比较，差异无统计学意义(PO．05)。 2．实验组角膜新生血管评分在术后3天，7天、15天、1个月随时间延长逐渐升 高，至术后1个月达最高，后逐渐降低。对照组角膜新生血管评分在术后3天、 7天、15天逐渐升高，术后15天达到最高，后逐渐减退。统计分析显示，两 组术后各时间点角膜新生血管评分比较，术后3天及术后1个月、3个月、6个 月差异无统计学意义(PO．05)，其余时间点差异均有统计学意义(P 0．05)。 3．术后3天，实验组角膜中央上皮层大部分缺损，周边上皮正在向中央生长， 均匀红染的胶原物质覆盖表面，基质层水肿，炎性细胞在植片与切口交界处 明显。术后7天，角膜表面单层上皮细胞局部覆盖，基质层内可见逐渐降解 的胶原物质，浅层基质胶原纤维排列紊乱，并且大量成纤维细胞，散在少量 淋巴细胞。术后15天，浅层基质仍有较多的成纤维细胞，沉积的胶原纤维排 列仍不规则。术后1个月，角膜上皮覆盖完全，浅基质层胶原纤维排列趋于 规则，但仍较正常基质紊乱。术后3个月，上皮修复良好，浅基质层胶原纤 维走行与下方胶原纤维排列趋于一致。至术后6个月，角膜上皮修复，胶原 纤维排列规则，部分区域存在小的胶原紊乱区。对照组术后3天，角膜上皮 局部缺损，浅基质水肿明显，成纤维细胞略有增加。术后7天角膜上皮修复 良好，基质水肿减轻，成纤维细胞数量增加较明显。术后15天，上皮完整， 基质层胶原纤维排列基本规则，成纤维细胞数量有所减少。术后1个月，胶 原纤维排列趋于一致，局部欠规则。术后3个月及6个月，细胞层次清楚，基 质层胶原排列规则。 4．免疫组化显示术后6个月角膜上皮细胞特异性标志蛋白K3检测为阳性表达。 结论 胶原基含糖半互穿网络角膜替代物在体外支持角膜上皮生长，细胞间连接 天津医科大学硕士学位论文紧密，形成连续的细胞上皮层。该材料在兔角膜组织内能支持角膜上皮的生长， 天津医科大学硕士学位论文 紧密，形成连续的细胞上皮层。该材料在兔角膜组织内能支持角膜上皮的生长， 促进活性角膜基质的改建，下一步我们将继续提高角膜材料体内移植的稳定性， 加强其机械强度，降低材料的免疫性。胶原基