降钙素对软骨细胞炎症反应及p38MAPK信号通路的影响-基础医学专业论文.docxVIP

万方数据 万方数据 The Effect of Calcitonin on Inflammatory in Chondrocyte and P38MAPK Signaling Dissertation Submitted to North China University of Science and Technology in partial fulfillment of the requirement for the degree of Master of Medicine by Yan Xiaoling (Pathology and Pathophysiology) Supervisor: Professor Wang Wenya June, 2015 独 创 性 说 明 本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究 工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的 地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，也不包含 为获得华北理工大学以外其他教育机构的学位或证书所使用过的材 料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中做了 明确的说明并表示了谢意。 论文作者签名： 日期： 年 月 日 关于论文使用授权的说明 本人完全了解华北理工大学有关保留、使用学位论文的规定， 即：已获学位的研究生必须按学校规定提交学位论文，学校有权保 留、送交论文的复印件，允许论文被查阅和借阅；学校可以将学位论 文的全部或部分内容采用影印、缩印或编入有关数据库进行公开、检 索和交流。 作者及导师同意论文公开及网上交流的时间： □ 自授予学位之日起； □ 自 年 月 日起。 作者签名： 导师签名： 签字日期： 年 月 日 签字日期： 年 月 日 摘 要 摘 要 目的 本实验通过观察降钙素对白介素 1β（IL-1β）诱导的大鼠软骨细胞中基质金 属蛋白酶 13（MMP-13）、Ⅱ型胶原（ColⅡ）、p38、P-p38 及 c-myc 表达的影 响，探讨降钙素是否通过阻断 p38MAPK 信号通路抑制 IL-1β 引起的大鼠软骨细胞 的炎性损伤。 方法 体外获得、培养大鼠关节软骨细胞。采用甲苯胺蓝及免疫细胞化学染色方 法鉴定软骨细胞。MTT 法检测细胞增殖率，确定实验所需降钙素浓度。将第 2 代 软骨细胞分为 7 组，分别为：A 组空白对照组，加入完全培养基；B 组 IL-1β 诱导 组，加入含 10ng/ml IL-1β 的完全培养基；C 组降钙素对照组，加入含 50ng/ml 降 钙素的完全培养基；D 组 IL-1β+降钙素干预组，加入含 10ng/ml IL-1β 的完全培养 基 15min 后再加 50ng/ml 降钙素；E 组 IL-1β+SB203580 干预组，加入含 10ng/ml IL-1β 的完全培养基 15min 后再加 10μmol/L SB203580；F 组降钙素+SB203580 联 合对照组，加入含 50ng/ml 降钙素和 10μmol/L SB203580 的完全培养基；G 组 IL- 1β+降钙素+SB203580 联合干预组，加入含 10ng/ml IL-1β 的完全培养基 15min 后 再加入 50ng/ml 降钙素和 10μmol/L SB203580。24h 后做相应处理，用免疫细胞化 学染色、Western Blot 观察和检测 MMP-13、ColⅡ、p38、P-p38 及 c-myc 的表达 情况。 结果 1 甲苯胺蓝和 ColⅡ免疫细胞化学染色结果说明体外培养细胞为软骨细胞， 能够用来进行下一步实验；2 MTT 结果提示浓度在 50-500ng/ml 范围的降钙素对软 骨细胞抑制率无显著差异，故实验中的降钙素浓度选取 50ng/ml 浓度。3 Western Blot 结果：1）各组 p38 表达无显著差异（P＞0.05）；P-p38 在 B 组的表达显著高 于其它各组（P＜0.05），在 D、E、G 组的表达高于 A 组而低于 B 组（P＜ 0.05），D、E、G 组间无显著差异（P＞0.05）；2）c-myc 和 MMP-13 在 B 组的表 达显著高于其他各组（P＜0.05），在 D、E 组的表达高于 A 组而低于 B 组（P＜ 0.05），D、E 组间无显著差异（P＞0.05），在 G 组的表达低于 B、D、E 组而高 于 A 组（P＜0.05）；3）ColⅡ在 B 组的表达显著低于其它各组（P＜0.05），在 D、E、G 组的表达低于 A 组而高于 B 组（P＜0.05），D、E、G 组间无显著差异 （P＞0.05）；各 A、C、F 组间无显著差异（P＞0.05）。4 对 MMP-13、ColⅡ、 p38、P-p38 及 c-myc 进行免疫细