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降钙素基因相关肽促进体外培养的神经干细胞向神经元分化 中文摘要
降钙素基因相关肽促进体外培养的神经干细胞向神经元分化
中文摘要
目的:探索降钙素基因相关肽(Calcitonin gene-related peptide,CGRP)对体外培养 的新生小鼠室管膜下区神经干细胞增殖和分化的影响。
方法:分离新生小鼠室管膜下区组织,经机械法和酶消化法制成单细胞悬液,抗 SOX-2 和抗 Nestin 免疫荧光染色,鉴定分离培养的细胞。以未添加 bFGF 和 EGF 的 无血清培养基诱导神经干细胞分化。取体外培养至第 3 代的神经干细胞,分为 4 组, 分别为对照组、1nM CGRP 组、10nM CGRP 组、100nM CGRP 组。MTT 法寻找体外 培养神经干细胞最佳的增殖时间,BrdU 标记法和神经球体积测量法来检测各组之间 神经干细胞增殖能力的差异。采用免疫细胞化学染色方法来标记神经元(Neuronal class IIIβ‐tubulin,Tuj-1)、星形胶质细胞(Glial fibrillary acidic protein,GFAP), 并分别统计体外诱导分化培养 3 天、7 天各组之间 Tuj-1 阳性细胞占总细胞数的比例, 进而比较不同体外培养时间各组之间神经干细胞向神经元分化的能力的强弱。
结果:MTT 法提示体外培养 4 天神经干细胞增殖能力最强。体外培养 4 天时, 各组之间的 BrdU 阳性细胞数及神经球体积无明显差异。体外诱导分化 3 天,对照组、 1nM CGRP 组、 10nM CGRP 组、 100nM CGRP 组中 Tuj-1 的百分比分别为 (26.1±5.1)%,(28.1±6.1)%,(34.7±4.8)%及(56.0±5)%,其中 100nM CGRP 组中 Tuj-1 的百
分比相对于其他 3 组明显升高(P0.05);而体外诱导分化 7 天,对照组、1nM CGRP 组 、 10nM CGRP 组 、 100nM CGRP 组 中 Tuj-1 的 百 分 比 依 次 为 (45.4±4.2)%,(53.8±4.3)%,(70±2.6)%和(48.8±4.1)%,其中 10nM CGRP 组中 Tuj-1 的百
分比相对于其他 3 组明显升高(P0.05)。
结论:CGRP 无明显促进体外培养的神经干细胞的增殖作用,但是可以促进体外 培养的神经干细胞向神经元分化,而且这种促分化作用具有浓度及时间依赖性。
关键词:降钙素基因相关肽;室管膜下区;神经干细胞;增殖;分化。
作 者:张 涛 指导教师:沈忆新 教授
Abstract Calcitonin gene-related peptide stimulates neuronal differentiation of neural stem cells in vitro
Calcitonin gene-related peptide stimulates neuronal differentiation of neural stem cells in vitro
Abstract
Objiective: To investigate the effects of calcitonin gene-related peptide (CGRP) on the proliferation and neuronal differentiation of neural stem cells (NSCs) isolated from the newborn mice in vitro.
Methods: Neural stem cells were isolated enzymatically and mechanically from Subventricular zone (SVZ) of neonatal mice and cultured as free-floating c
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